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文献和实验一、目的MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员,必须按照本文件相关的操作规程进行操作。二、适用范围适用于疾控中心所有技术人员 。三、程序(一)生物安全要求实验室生物安全级别:BSL-1所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。(二)材料1. 生长成片的MDCK细胞2. 无菌的T25细胞培养瓶3. D-MEM培养液(含有L-谷氨酰胺)4. 青、链霉素母液(10000 U/mL青霉素G;10000µg/mL硫酸链霉素),分装后保存于-20
一、目的MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员,必须按照本文件相关的操作规程进行操作。二、适用范围适用于疾控中心所有技术人员 。三、程序(一)生物安全要求实验室生物安全级别:BSL-1所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。(二)材料1. 生长成片的MDCK细胞2. 无菌的T25细胞培养瓶3. D-MEM培养液(含有L-谷氨酰胺)4. 青、链霉素母液(10000 U/mL青霉素G;10000µg/mL硫酸链霉素),分装后保存于-20
15%胎牛血清(FBS),4 mM谷氨酰胺,10 μM 2-巯基乙醇,1%MEM非必需氨基酸,每毫升50 IU青霉素,每毫升50 μg链霉素,和每毫升103U的LIF (ESGRO;Chemicon,Temecula CA)或者10 ng/mL的抑瘤素M(R&D Systems,目录#295-OM),以此培养ES细胞。细胞生长于辐射照过的小鼠胚胎滋养细胞(MEFs)上或者0.1%明胶包被的平板上。细胞每两天传代一次。 把106个细胞传到含有10%FBS,每毫升50 IU青霉素
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