Recombinant Human RAP1A

商品属性：

货号	XG-DB3200	种属	Human
宿主	E.Coli	表达区间	1-181
分子量	19.8 kDa	标签	N-terminal His Tag
规格	50μg、200ug、1mg	用途	仅供科研实验

商品介绍：

别称：C21KG, G 22K, G-22K, GTP binding protein smg p21A, GTP-binding protein smg p21A, KREV 1, KREV1, OTTHUMP00000013741, RAP 1A, RAP1, RAP1A, RAP1A member of RAS oncogene family, RAP1A_HUMAN, Ras related protein Krev 1, Ras related protein Rap 1A, RAS related protein RAP1A, Ras-related protein Krev-1, Ras-related protein Rap-1A, SMGP21  纯度 Greater than 95% as determined by SDS-PAGE 应用  Western Blot, ELISA 性状  Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4 溶解方法Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex 存储 -20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：

表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。
公司正在出售的产品：
细胞色素 C(Cytochrome C)   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender    CRELD1 Protein Human 重组人 CRELD1 蛋白 (His 标签)
DCR3   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender    ALDH1A3重组人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 标签) Protein
sCD44var (v5)   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender    TNFRSF1A Protein Rat 重组大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His 标签)
sCD44var (v6)   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender    BSA (bovine serum albumin 5gBSA (bovine serum albumin) 牛血清白蛋白(第五组分)
sCD137   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender    CTSA重组小鼠 Cathepsin A / CTSA 蛋白 (His 标签) Protein
sCD153 (sCD 30L )   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender    LOXL2 Protein Human 重组人 LOXL2 / Lysyl oxidase homolog 2 蛋白 (His 标签)
sCD30   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender    IgG4重组人 IgG4-Fc 蛋白 (108 Ser/Pro) Protein
血小板内皮细胞黏附因子 (PECAM-1/sCD31)   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender    THOP1 Protein Mouse 重组小鼠 THOP1 蛋白 (His 标签)
sCD40   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender    IFN- Beta (Interferon Beta 0.5mgIFN- Beta (Interferon Beta)Anti-mouse,rat 干扰素-β抗原
可溶性细胞表面分化抗原 40 配体 (sCD 40L )   作用：   ELISA   规格：   96T   奥地利 Bender    EPCAM重组食蟹猴 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白 (His 标签) Protein
Recombinant Human RAP1AS100钙结合蛋白A11   英文名称：   Human S100 Calcium Binding Protein A11      英文缩写：   S100A11    KLRK1 Protein Human 重组人 NKG2D / CD314 蛋白 (aa 78-216, His 标签)
英文名称：   Human S100 Calcium Binding Protein A12   规格：      英文缩写：   S100A12    DSC2重组人 DSC2 / Desmocollin-2 蛋白 (His 标签) Protein