Recombinant Human CDKN2AIPNL

重组蛋白的制备涉及多个步骤，包括基因克隆、表达系统选择和蛋白纯化：
● 基因克隆：基因克隆是将目标基因导入表达载体中的过程。研究人员可以选择不同的克隆方法，如限制性酶切克隆、PCR扩增克隆等，根据需要构建目标基因的DNA序列。
● 表达系统选择：选择适合的表达系统是重组蛋白制备的关键一步。常用的表达系统包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都具有不同的优缺点，适用于不同类型的蛋白质表达。
5大蛋白表达系统：
表格
表达、纯化、复性和定量，具体步骤如下：
一、重组蛋白质的诱导表达
1. 挑取转化有质粒的单菌落， 接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养过夜。
2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10ml（1:20）选择性 LB 液体培养基 中， 37 oC，250 rpm/min 振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取 1 ml 样本作 为诱导前标本， 10000g 离心 1min 收集菌体沉淀，－20 oC 冻存备用。
3. 加入 1 mol/L IPTG 于菌液中，使 IPTG 终浓度为 1 mM ，37 oC ，250 rpm/min 振摇培养 4 ～ 5 小时。取 1 ml 样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀， -20 oC 冻存备用。
4. 将诱导前后菌体沉淀用 20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬， 加入等体积的 2×SDS 上样缓冲液， 煮沸加热 5min，SDS 凝胶（SDS-PAGE）电泳分离 ， 考马斯亮蓝染色 3 小时后，脱色观察结果。
5. 选取诱导成功的细菌克隆，扩大诱导规模，收集菌体沉淀，于－ 20 oC 保存，准备做下一步分析及纯化。

二、重组蛋白质的分离纯化
重组蛋白质的可溶性鉴定
1. 将按上法诱导培养后收集的菌体重悬于裂解液 1 (Lysis buffer under native conditions )中，然后在－80 oC 低温冰箱中放置 10 min。
2. 冰中解冻。
3. 在冰浴上用超声破碎仪破菌 6 次， 每次 10 sec，间歇 10 sec，电压 200-300 V。
4. 10000g，4oC，离心 20min，取上清（为溶液 A）， － 20 oC 保存； 另将沉淀用 同样裂解液 1 溶解（为溶液 B），同样 －20 oC 保存，供后继分析使用。
5. 将上述 A、B 溶液和诱导前后的细菌进行 SDS-PAGE 电泳， 考马斯亮蓝染色， 比较分析重组蛋白质的溶解性。如果诱导表达的蛋白质位于 A 溶液中， 则为
可溶性蛋白；如果是在 B 溶液中，则为非可溶蛋白。
公司正在出售的产品：
兔转化生长因子β2(TGFβ2)ELISAKit    PLAT重组小鼠 tPA / PLAT 蛋白 (Fc 标签) Protein
兔基质金属蛋白酶 1   英文名称：   Rabbit Maix Metalloproteinase 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   MMP-1    激肽释放酶8(KLK8)重组蛋白 Recombinant Kallikrein 8 (KLK8)
兔热休克蛋白90elisa试剂盒   兔热休克蛋白90试剂盒   规格型号：96T/48T   兔热休克蛋白90试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔热休克蛋白90试剂盒、兔热休克蛋白90 elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。    IL34 Protein Mouse 重组小鼠 IL-34 蛋白 (His 标签)
兔内皮型合成酶elisa试剂盒   兔内皮型合成酶试剂盒   规格型号：96T/48T   兔内皮型合成酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔内皮型合成酶试剂盒、兔内皮型合成酶elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。    N6AMT1 Protein Human 重组人 N6AMT1 / HEMK2 蛋白 (His 标签)
兔胱抑素C(rabbit Cystatin C)   作用：   ELISA       METAP1D重组人 MAP1D / Methionine Aminopeptidase 1D 蛋白 (His 标签) Protein
兔钩端螺旋体IgGelisa试剂盒   兔钩端螺旋体IgG试剂盒   规格型号：96T/48T   兔钩端螺旋体IgG试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔钩端螺旋体IgG试剂盒、兔钩端螺旋体IgG elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。    HA重组甲型流感 H4N6 (A/mallard/Ohio/657/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 标签) Protein
兔白介素-1β(rabbit IL-1β)   作用：   ELISA       核糖核酸酶A12(RNASE12)重组蛋白 Recombinant Ribonuclease A12 (RNASE12)
吐温80   100ml    IL20RB Protein Rat 重组大鼠 IL20RB 蛋白 (Fc 标签)
盐快速测试盒   Niate rapid test case    CD22 Protein Human 重组人 Siglec-2 / CD22 蛋白 (His 标签)
Recombinant Human CDKN2AIPNL碱性酯酶染液   Wright'dye    RP2重组人 XRP2 / RP2 蛋白 (GST 标签) Protein
固   英文名称：   Aldosterone   规格：   48T/96T   英文缩写：   Aldosterone    CHL1重组小鼠 CHL-1 蛋白 (His 标签) Protein
十六烷基-二甲基-乙基-溴化铵   50g    白血病抑制因子(LIF)重组蛋白 Recombinant Leukemia Inhibitory Factor (LIF)
重组蛋白质为非可溶性蛋白（ 变性条件下）的分离纯化
1. 将菌体沉淀溶于适量裂解液 2（Lysis buffer under denaturing conditions ）中，室温下搅拌和吹打沉淀，避免泡沫生成。
2. 10000g ，4 oC，离心 30 min，收集上清液。
3. 将 Ni-NTAAgarose 充填柱子，并连接于 Pharmarcia 低压液相层析系统，用 5 倍柱体积的裂解液 2 平衡 Ni-NTAAgarose，调节 A280 值至零线。
4. 将适量上清液上样到 Ni-NTAAgarose 柱子中， 并用 lysis buffer 冲洗至 A280 值低于 0.01。
5. 分别用 5 ～ 10 倍柱体积的清洗液 1 和清洗液 2（Washbuffer 1 and 2）清洗柱 子，直至 A280 值低于 0.01。
6. 用洗脱液（Elution buffer）洗脱重组蛋白质， 在 A280 值监测下，收集出现峰 线后含有重组蛋白的所有洗脱液。