细菌死活染色试剂盒(DMAO/PI)

碧云天研发生产的细菌死活染色试剂盒(DMAO/PI)，即LIVE/DEAD Bacterial Staining Kit with DMAO & PI，或LIVE/DEAD Bacterial Viability Kit with DMAO and PI，也称细菌活力检测试剂盒(Bacterial Viability Assay Kit)或细菌毒性检测试剂盒(Bacterial Cytotoxicity Assay Kit)，是一种高效、便捷、灵敏的基于DNA绿色荧光染料DMAO和红色荧光染料碘化丙啶(Propidium iodide, PI)的双荧光染色法检测细菌死活的试剂盒。本试剂盒检测时，活细菌呈现绿色荧光，死细菌呈现绿色和红色两种荧光。本试剂盒可使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪、流式细胞仪等荧光检测系统进行检测。

DMAO，即N, N-dimethylaniline N-oxide，是一种核酸绿色荧光染料，对于革兰氏阳性和阴性细菌均适用，且既能染色活细菌，也能染色死细菌。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，优先结合双链DNA。DMAO非常稳定，在室温下进行常规操作和保存不易降解。PI是一种非渗透性荧光染料，不能穿过具有生物活性的细胞质膜，因此对于具有完整细胞膜的细菌不能染色。而对于坏死细菌，其细胞膜的完整性丧失，PI可进入细胞核并与双链DNA结合，并嵌入细菌的DNA双螺旋形成PI-DNA复合物从而产生红色荧光，这种结合很少或几乎没有序列偏好，每4-5个碱基对插入一分子PI染料[1,2]。将DMAO与PI联合使用检测细菌的死活，具有完整细胞膜的活细菌呈现绿色荧光，细胞膜受损的死细菌同时呈现绿色与红色荧光[3-6]。

DMAO-DNA复合物的最大激发光波长为503nm，最大发射光波长为530nm；PI-DNA复合物的最大激发光波长为535nm，最大发射光波长为617nm。DMAO-DNA和PI-DNA的激发光谱和发射光谱参考图1，可分别使用FITC和Cy3通道观察。

图1.DMAO-DNA和PI-DNA的激发光谱和发射光谱。

本试剂盒提供的DMAO与PI均为1000X的储存液，溶液经过优化，对大多数细菌都适用，但为了获得更满意的结果，对于不同类型的细菌请自行进行一定的浓度摸索，DMAO和PI的使用终浓度一般为0.5-2X，最`优先的推荐终浓度为1X。同时，本试剂盒提供检测缓冲液，该缓冲液可用于细菌死活染色工作液的配制。使用本试剂盒检测细菌死活的效果参考图2。

图2.碧云天细菌死活染色试剂盒(DMAO/PI) (C2030)对大肠杆菌DH5α菌株染色的效果图。DMAO和PI双染叠加(Merge)后可以非常清晰地观察到活细菌和死细菌的荧光染色差别。死细菌组(Dead Bacteria Group)即Dead Bacteria Ratio为~100%组，红绿荧光染色数目基本一致，两种荧光几乎完全重合，叠加后呈黄色；活细菌与死细菌混合组(Live/Dead Bacteria Group)即Dead Bacteria Ratio为~30%组，两种荧光叠加后，活细菌呈绿色，死细菌呈黄色；活细菌组(Live Bacteria Group)即Dead Bacteria Ratio为~5%组，两种荧光叠加后，可见基本为绿色荧光，黄色荧光基本不见或仅个别可见。实际检测效果会因实验条件、染料浓度、细菌种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。

本试剂盒使用荧光酶标仪检测细菌死活标准品的效果参考图3，在0-100%的细菌存活率范围内有良好的线性关系。

图3.碧云天细菌死活染色试剂盒(DMAO/PI) (C2030)对不同细菌死活比例DH5α菌株的检测效果。活细菌占比越高，红色荧光越少，红绿比值越低。实际检测数据会因实验条件、染料浓度、细菌种类、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒小包装和中包装用于荧光显微镜或荧光酶标仪检测时，可以分别进行200次和1000次的检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C2030S-1	DMAO (1000X)	20µl
C2030S-2	PI (1000X)	20µl
C2030S-3	检测缓冲液	1ml
—	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
C2030M-1	DMAO (1000X)	100µl
C2030M-2	PI (1000X)	100µl
C2030M-3	检测缓冲液	5ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。其中DMAO (1000X)和PI (1000X)须避光保存。

注意事项：

细菌染色前应去除培养基，培养基内的组分会结合DMAO与PI染料，使染色效率降低。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

初次使用时DMAO (1000X)和PI (1000X)可适当分装后-20ºC保存，以避免反复冻融。

检测缓冲液经过过滤除菌处理，在使用时须注意避免微生物污染，否则很可能严重影响染色效果。如果检测缓冲液发生浑浊等明显的微生物污染，就不能继续使用。

荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板，推荐使用碧云天BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP966)或BeyoGold™黑色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP965)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。