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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
53
- 英文名:
Phosphate Buffered Saline
- 供应商:
上海联祖
- 规格:
10个/盒
中文名称:含90ml磷酸盐缓冲液均质袋
英文名称:Phosphate Buffered Saline
产品规格:10个/盒
发货周期:1~3天
产品价格:询价
| 货号 | 规格 | 发货期 | 用途 |
| LZ-PYJ3358 | 10个/盒 | 1~3天 | 仅供科研实验 |
培养基操作步骤:
一、用法:称取本品33.0g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌15分钟,备用。
二、配料:首先,根据培养基的配方,准确称量各种成分,包括粉状和非粉状的成分,如肉膏等,放入烧杯中。
三、溶化:向烧杯中加入适量的水,然后搅拌以溶解各成分。对于含有琼脂的培养基,应注意防止外溢,并在溶化过程中保持搅拌。
四、矫正pH:在培养基溶解均匀并冷却至室温后,使用pH试纸测量pH值,然后根据需要加入酸或碱来调整至合适的pH值。
五、澄清过滤:使用滤纸或多层纱布对培养基进行过滤,以去除杂质。
六、分装:将制备好的培养基分装入试管内或三角瓶内,确保管(瓶)口塞上棉塞,以防止外界微生物污染。
七、灭菌:对分装好的培养基进行灭菌处理,通常是通过高压灭菌来确保无菌环境。
八、检定:灭菌后的培养基可以进行质量检定,以确保其符合使用要求。
培养基的计数方法:
一、稀释涂布平板法(亦称活菌计数法)是一种常用的微生物计数方法,其原理是当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,可以推测出样品中大约含有多少活菌。这种方法操作简便,适用于菌体大小和质量都相近的类群,如细菌、酵母菌等的计数。计算公式为每克样品中的菌株数=C/V*M,其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。
二、显微镜直接计数法利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。这种方法不能区分死菌与活菌,但可以估算出1mL培养中液中细胞个数,计算公式为1mL 培养中液中细胞个数=小方格中细胞平均数×400 ×104×稀释倍数(个/mL)。显微镜直接计数法的缺点是不能区分死菌与活菌,因此计数到的细胞数包括了死亡的细胞数。
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如何配置培养基:
1、配制溶液
向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。
2、调节pH值
用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。
3、过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
4、分装
已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
5、加棉塞
分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
6、制作斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。
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文献和实验2~4 h,使抗体与 protein A 琼脂糖珠偶连; 免疫沉淀反应后,在 4 ℃ 以 3 000 rpm 速度离心 3 min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3~4 次;最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液,沸水煮 5 分钟; SDS-PAGE,Western blotting 或质谱仪分析。 四、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜
/L 磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)磷酸氢二钠 (Na2 HPO4,28.4 g/L)440 mL, 磷酸二氢钠 (NaH2PO4·H2O,27.6 g/L)60 mL,调 pH 至 7.4,0.103 MPa 20 min 灭菌或滤菌。1.2.1.3 辅酶-Ⅱ(氧化型) 溶液无菌条件下称取辅酶-Ⅱ,用无菌蒸馏水溶解配制成 0.025mol/L 溶液,现用现配。 1.2.1.4 葡萄糖- 6 -磷酸钠盐溶液称取葡萄糖- 6 磷酸钠盐, 用蒸馏水溶解配制成 0.05 mol/L 溶液,过滤灭菌。现用
的时候出问题了 细胞估计已经破裂 固定时候应该缓慢添加固定液 有的时候固定液就是用PBS和无水乙醇配置的。 Fasta921 我做的步骤:接种适当浓度细胞于培养皿中,培养过夜后,经0.25%胰蛋白酶消化,冷磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后离心,用70%(体积分数)预冷乙醇悬浮细胞于-20度固定过夜后,离心收集细胞,用PBS洗3次去除乙醇,细胞团重悬于PBS中,用20 μg/ml含RNaseA的碘化丙啶PI染色液避光染色30 min,经100目尼龙
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