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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
2-8°C储存
- 英文名:
Phosphatase, Alkaline from Escherichia coli
- 库存:
现货
- 供应商:
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格:
P128630-5mg/P128630-10mg
| 规格: | P128630-5mg | 产品价格: | ¥1852.9 |
|---|---|---|---|
| 规格: | P128630-10mg | 产品价格: | ¥3295.9 |
Alkaline phosphatase is a broad term associated with non-specific phosphomonoesterases with an alkaline pH optimum.Alkaline phosphatase is used for conjμgation to antibodies and other proteins for ELISA, Western blotting, and histochemical detection. It may be used for protein labeling when high sensitivity is required.
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文献和实验一、实验目的 1.掌握酶分离纯化的一般步骤及相关原理; 2.悉碱性磷酸酶的分离纯化的方法步骤。 二、实验原理 有机溶剂分级沉淀是分离蛋白质的常用方法之一。有机溶剂能使许多溶于水的酌生物大分子发生沉淀,其主要作用是降低水溶液的介电常数。例如20℃时水的介电常数为80,82%的乙醇溶液的介电常数为40。溶液的介电常数降低意味着溶质分子间异性电荷库仑引力增加,从而使溶质的溶解度降低
高。如果有相同的抗原决定簇时,则会有交叉反应。方法成熟,使用广泛的还是经典的组织化学方法。下面以碱性磷酸酶的显示方法来学习经典酶组织化学的理论及操作。经典酶组织化学不是显示酶本身,常采用的方法是:在一定条件下,使细胞中的酶作用于酶的底物,使其产物在原地进行捕捉、沉淀转化为有色产物。碱性磷酸酶(AKP)的显示方法最早由Gomeri(1939)提出,现在这种方法称为Gomeri法。碱性磷酸酶是指磷酸单酯酶Ⅰ,它能在pH8.6~10.0的最适条件下分解磷酸单酯,对于与磷酸相接的醇基没有特异性,Gomeri法
磷酸钠,α-萘酚磷酸钠)分解,产生的磷酸离子被孵育液中的钙离子捕获生成磷酸钙沉淀。因磷酸钙不能显色,需加入硝酸钴,用钴离子置换钙离子,形成磷酸钴沉淀后用硫化铵处理,形成棕黑色硫化钴颗粒沉淀,从而显示酶活性部位,硫化钻沉淀的多少与碱性磷酸酶含量成正比,其反应通式 碱性磷酸酶钙-钴法反应原理1)孵育液配制2%氯化钙 20ml2%巴比妥钠 10ml3%β甘油磷酸钠 10ml5%硫酸镁 5ml蒸馏水 5ml孵育液最终pH 9.4,置于冰箱
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