快速内切酶StuI，EnzymoPure™，阿拉丁

外源基因在真核细胞表达步骤

载体只有被酶切线性化整合效率才能大大提高，环状质粒整合效率是很低的。选用不同的内切酶线性化可得到不同的转化子。如对载体pPC19选用BgiⅡ线性化，转化后可得到Muts表型转化子；选用SaI或StuI线性化，转化后可得到Mut表型转化子。3、转化 目前对真核细胞的转化方法有多种，例如对于P.Pastoris的转化目前有4种方 法：①锂盐法；②PEG法；③原生质球法；④电穿孔法。锂盐法和PEG法方法简便，但效率很低，每微克DNA只有几十个转化子或更低，一般不多用。原生质球法和电穿孔法转化率都较高，而且一般可得

体内体外表达――Promega

(发音为ten a)的蛋白水解位点，使得纯化标签可从天然蛋白上分离。载体还带有方便得多克隆区域，便于构建融合蛋白。整个表达系统不过4000人民币，已经包含载体菌株检测试剂纯化柱和洗脱试剂等等，一如Promega产品的实惠价格。多系统表达，东边不亮西边亮Flexi® 载体系统是一种用于定向克隆蛋白编码序列的、简单而功能强大的方法。它是以两种稀有的限制性内切酶：Sgf I 和 Pme I为基础。这两种酶在我们试验常用到的物种：人、大鼠、小鼠、线虫等中出现频率都非常小，一般情况都在5%一下。该系统提供快速

mRNA富集还是rRNA去除

并被共同捕获出来。 Poly(A) 富集是一种非常经济高效且快速的预处理方法，可以选择主要编码蛋白质的 mRNA。它可用于所有具有 poly(A) 尾 RNA 的物种（真核生物），以去除不需要的 rRNA 并将测序数据集中在 mRNA 上。 然而，poly(A) 富集有两个主要缺点： ➊首先，它只能用于具有poly(A)-尾RNAs的物种。因此，它仅限于真核生物，不能用于原核生物。然而，真核生物也拥有我们感兴趣的缺少 poly(A) 尾的转录本。它们在 poly(A) 选择过程中