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NEB原核表达系统

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去Tag不留痕――NEB原核表达系列

New England Biolabs，在实验室工作时间较长的人都不会陌生，特别是海归派。成立于上个世纪七十年代中期，NEB是当今全球限制性内切酶最重要的供应商，超过30%已知的限制性内切酶是首先在NEB发现的。NEB供应的限制型内切酶种类足有210多种，也是最多的（目前仅有少数几个被其他公司专利的内切酶NEB不提供，比如Stratagene独家的的DpnI），其中有130 多种重组酶――通过重组克隆技术，NEB酶产量大幅高，而且能纯化到结晶纯，质量非常稳定可靠，而且量特别足，价格也越来越实惠

克隆启动子的方法

1.1　利用启动子探针载体筛选启动子启动子探针型载体是一种有效、经济、快速分离基因启动子的工具型载体，包含2个基本部分：转化单元和检测单元。其中，转化单元含复制起点和抗生素抗性基因，用于选择被转化的细胞；检测单元则包括1个已失去转录功能且易于检测的遗传标记基因以及克隆位点。利用启动子探针载体筛选启动子的过程为，先选用1种适当的限制性核酸内切酶消化切割染色体DNA，然后将切割产生的DNA限制片段群体与无启动子的探针质粒载体重组，并按照设计的要求使克隆的片段恰好插在紧邻报告基因的上游位置；随后再把重组混合