- ¥299.90
- 阿拉丁
- 上海
- L397875
- 2026年05月08日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20°C储存；超低温运输
- 英文名：
XhoI
- 库存：
现货
- 供应商：
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格：
L397875-1kit
基本描述
产品名称：快速内切酶XhoI
规格或纯度：EnzymoPure™
产品介绍：
产品组成
|
产品简介
快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的限制性内切酶，适用于质粒 DNA、 PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。快速内切酶具有如下特点：5~15 分钟内即可完成酶切；共用一种酶切 Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度，轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，去磷酸化、连接试剂在酶切 Buffer 中具有 100% 活性，支持一管化反应，提升“酶切 - 修饰 - 连接” 的体验。
建议反应条件
1× 缓冲液；
37℃温育；
参照“DNA 快速酶切流程”配制反应体系。
失活条件
80℃温育 20 min。
质量控制
功能活性检测：最适反应温度下，在 20 μl 反应体系中，1 μl 快速内切酶XhoI 能够在 15 min 内完全消化 1 μg λDNA (HindIII digest)。
超长时间温育检测：最适反应温度下，将 1 μl 快速内切酶 XhoI 与 1 μg λDNA (HindIII digest) 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。
酶切 - 连接 - 再酶切检测：最适反应温度下，使用 1 μl 快速内切酶 XhoI 消化底物，回收酶切产物。在 22℃下使用适量 Fast T4 DNA Ligase 可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。
非特异性内切酶活性检测：最适反应温度下，将 1 μl 快速内切酶XhoI 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 共同温育 4 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，质粒 DNA 仍然处于超螺旋状态。
蓝白斑检测：将含有单一 lacZα 基因的载体以 1 μl 快速内切酶 XhoI 消化，重新连接后转化入大肠杆菌感受态细胞，涂布在含有对应抗生素、IPTG 和 X-gal 的 LB 培养基平板上。连接正确的产物会生长出蓝色菌落， 而连接错误（即 DNA 末端切口不完整）的产物将得到白色菌落。对 于快速内切酶系列限制酶而言，白色菌落比例应小于 1%。
使用方法
1. DNA 快速酶切流程
① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：
| 质粒DNA | PCR产物 | 基因组DNA | |
| ddH₂O | 15μl | 16μl | 30μl |
| 10×Buffer或10×Color Buffer | 2μl | 3μl ᵃ | 5μl |
| 底物DNA | 2μl(up to 1μg) | 10μl(~0.2μg) | 10μl(5μg) |
| XhoI | 1μl | 1μl | 5μl |
| Total | 20μl | 30μl | 50μl |
a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度，10×Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
③ 37℃温育 15 min（质粒），或 15~30 min（PCR 产物），或 30~60 min（基因组 DNA）；
④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活，停止反应（可选）。
2. 双酶切或多酶切
① 每种快速内切酶的用量为 1 μl，并根据需要适当扩大反应体系；
② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10；
③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
3. 适用于质粒的扩大反应体系
| DNA | 1μg | 2μg | 3μg | 4μg | 5μg |
| XhoI | 1μl | 2μl | 3μl | 4μl | 5μl |
| 10×Buffer或10×Color Buffer | 2μl | 2μl | 3μl | 4μl | 5μl |
| Total | 20μl | 20μl | 30μl | 40μl | 50μl |
注：如果总反应体系大于 20 μl，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴
不同 DNA 中的酶切位点数量
甲基化修饰影响
级别：EnzymoPure™
产品规格参数
储存条件：-20°C储存
运输条件：超低温运输
功能和特点
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验，GenbankDatabase。由于抗体基因编码FR区的部分比编码CDR区的部分要保守，因此可以将引物设计为FR区的互补序列。 针对抗体不同亚族其FR区序列也不尽相同的特点，本室设计了一组引物以确保不会漏掉某一亚族。选择与FR1区段互补的序列作为5’端引物，选择与FR4互补的序列作为3’端引物。扩增的产物是VH或VL基因。为了便于基因克隆，还在引物外侧加上了合适的酶切位点，重链是XhoI-SpeI，轻链是XbaI-EcoRI。 这些酶所识别的序列经计算机检索，证明很少或几乎不在抗体可变区基因
Restriction fragment length polymorphism)通过PCR扩增分枝杆菌染色体上一段DNA，将扩增产物经限制性内切酶消化，将消化的样品进行琼脂糖凝胶电泳分析，不同分枝杆菌酶切片段的数量或大小不同，电泳图谱呈现多态性。如对16-23srDNA基因PCR扩增，扩增片段（350bp）经识别4个碱基序列的限制性内切酶HaeⅢ、MPPI酶切消化后进行分析，可以鉴别不同分枝杆菌复合群。对分枝杆菌属特异的16srDNA片段PCR扩增，所得DNA片段(1500bp)经CfoI,MboI,RsaI
于与质粒和DNA片段的酶切效果。一般情况下，都在通用缓冲液中进行双酶切，但这两种酶在通用缓冲液中酶切效率不一样，这可能导致部分的单缺口的质粒片段存在，这样，在连接反应中，即使在外源DNA片段存在下，这种单缺口的质粒片段能够进行更快速有效自我连接。最终结果是大量假阳性的菌斑生长。对照连接反应中，在不加入外源片段情况下，实验结果如果有菌斑生长，说明双酶切不充分，质粒DNA必须重新进行双酶切。 实验案例分析2：本人曾用XhoI和HindIII酶切位点构建重组质粒，对质粒进行双酶切后，直接就做
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
