- ￥1197.90
- 阿拉丁
- 上海
- S665546
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
室温
- 英文名：
Soil And Stool DNA Kit
- 库存：
期货
- 供应商：
上海阿拉丁生化科技股份有限公司
- 规格：
S665546-50T
产品内容：
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产品简介
本试剂盒提供了一种从土壤或粪便样本中提取总DNA，包括样本中的细胞、细菌 、寄生虫以及病毒的总DNA的方法，也适用于含有高浓度PCR反应抑制剂的样本DNA 的提取。本试剂盒采用独特的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上，PCR 和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过洗涤步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或 水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于二代测序(16S扩增子和 宏基因组)、文库构建、PCR、qPCR、Southern Blot、酶切分子标记等下游实验。
自备试剂
1. 恒温混匀仪
2. 无水乙醇，异丙醇
3. 涡旋振荡仪或组织研磨仪
实验前准备及重要注意事项
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GW1（concentrate）和Buffer GW2（concentrate）中加入无水乙醇。
3．Buffer RIL待即将使用前取出，用完立即放在 2-8℃储存。
操作步骤
1. 短暂离心Lysis Tube以使珠子沉淀在底部。
2. a. 向Lysis Tube中加入0.1-0.3 g土壤或粪便样本，加入740-820 μL Buffer QSL与 4 μL RNase A，旋紧管盖，短暂涡旋以混合。
b. 若为非裂解型粪便保存液（例如CWY041S和CWY041M）保存的粪便样本，向 Lysis Tube中加入200 μL-600 μL固液混合物，13000 rpm离心1 min，弃掉保存液 （若离心后的固体量过少，可再次富集，但不宜超过0.3g）。加入620μLBuffer QSL和4 μL RNase A，旋紧管盖，短暂涡旋以混合。
3. 将Lysis Tube固定在装有2 mL适配器的振荡研磨装置中，并根据您的设备使用优 化的研磨条件进行处理（参见附录）。
4. 将Lysis Tube在恒温混匀仪上以70℃，1200 rpm振荡10 min。随后13000 rpm离心 2 min以沉淀固体颗粒。转移540 μL上清液至新的2 mL离心管。
5. 加入180 μL Buffer RIL，涡旋5 sec，13000 rpm离心2 min。
注意：Buffer RIL待即将使用前取出，用完立即放在2-8℃储存。
6. 在新的离心管中依次加入160 μL Buffer ML、480 μL步骤5的上清液、320 μL异丙 醇，涡旋5秒。
7. 将上步中溶液转移650 μL到到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中， 12,000 rpm（～13,400×g）离心1分钟。
8. 倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。重复步骤7直至溶液全部转移 完。
9. 向吸附柱中加入500μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10.向吸附柱中加入500 μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 11.重复步骤10。
12.12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底 晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、 PCR 等）。
13 将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空滴加50-200 μL Buffer EBL或灭菌水，室温放置2-5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶 液，-20℃保存DNA。
注意：1）离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
2）用另外的50-100 μL 洗脱缓冲液或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
3）如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤13所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤13， 但可能会减少总产量。
4）洗脱缓冲液不含螯合剂，请置于-20℃保存DNA。
5）基因组DNA模板中残余的微量PCR抑制物可能对PCR反应产生不良影响，可将DNA稀释2-10倍 通常即可解决。
附录：使用以下方法之一研磨样本
1.在涡旋振荡仪上以最大速度手动涡旋振荡10 分钟。
2.在搭配有1.5-2 mL水平离心管支架的涡旋振荡仪上以最大速度振荡10分钟（让 Lysis Tube保持水平放置）。若样本数量超过12，延长5-10 分钟。 例如使用Scientific Industries或Mobio的Vortex-Genie2 涡旋振荡仪。
3.使用Qiagen的TissueLyser II时，以25Hz研磨10 分钟。
4.使用Qiagen的PowerLyzer 24 Homogenizer时，以2000 rpm 的速度均质化30 秒，暂停30 秒，然后以2000 rpm的速度再次均质化30 秒。
5.使用MP Biomedicals的FastPrep-24时，推荐速度为 6.0，时间为 40 秒。
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三句话读懂一篇 CNS：老年血液会让年轻个体未老先衰？不抽烟不喝酒可大幅延长预期寿命
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物的DNA。多年来，我们对阴性对照进行了测序，只使用了实验室中使用的试剂，没有添加样品模板，同时进行了人体微生物菌群研究，并在测序结果中发现了不同程度的污染环境的细菌。这些包括土壤和水的居民，如Ralstonia，缓生根瘤菌，Herbaspirillum，假单胞菌和伯克霍尔德菌。我们认为它们起源于DNA提取试剂盒或PCR试剂，较早的出版物也证实在其他地方也观察到了这一现象。最近，我们还看到了一些描述来自低生物量环境的细菌的出版物，在这些环境中，与我们以前在阴性对照中观察到的污染物类似的细菌被强调
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