磁珠法土壤与粪便DNA提取试剂盒，阿拉丁

产品简介

该试剂盒提供了一种简单、快速、高效的提取DNA方法，适用于土壤和粪便样本。 在高盐存在时， DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后，高纯度的DNA被洗  脱于Buffer EBL或去离子水中。纯化得到的DNA纯度好（A260/280的比值在1.7-1.9之间）， 完整度高（>15 kb），可用于二代测序、定量PCR、芯片检测等下游实验。

该试剂盒可与CWE2100或CWE3200 32通道核酸提取仪和CWE9600或CWE960 96通道核酸提取仪进行匹配使用，简单、快速地进行高通量提取，大大降低了实验者 的工作量和实验中的人为误差。

自备仪器、试剂

1.  恒温混匀仪

2.  2/15 mL磁力架

3.  32通道核酸提取仪

4.  96通道核酸提取仪

5.  96 DW Plate

6.  8 channel Comb

7.  Spin tips pack

8.  无水乙醇，异丙醇

9.  涡旋振荡仪或组织研磨仪

注意事项

1.  第一次使用前按照试剂瓶标签向Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇并做好标 记。

2.  Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻、离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。

操作步骤

1.  样本前处理

1.1  短暂离心Lysis Tube以使珠子沉淀在底部。

1.2  A. 向 Lysis Tube中加入0.1-0.3g土壤或粪便样本，加入740-820 μL Buffer QSL与4 μLRNase A，旋紧管盖，短暂涡旋以混合。

B.若为非裂解型粪便保存液保存的粪便样本，向Ly- sis Tube中加入200 μL- 600 μL固液混合物，13000  rpm离心1  min，弃掉保存液 （若离心后的固体量过少，可再次富集，但不宜超过 0.3 g ）。加入620 μL Buffer   QSL和4 μL RNase A，旋紧管盖，短暂涡旋以混合。

1.3  将Lysis Tube固定在装有2mL适配器的振荡研磨装置中，并根据您的设备使用优 化的研磨条件进行处理（参见附录）。

1.4  将Lysis Tube在恒温混匀仪上以70℃,1200rpm振荡10 min。随后13000 rpm离 心2 min以沉淀固体颗粒。转移540 μL上清液至新的2 mL离心管。

1.5  加入180 μL Buffer RIL，涡旋5 sec ，13000 rpm离心2 min。 注意： Buffer RIL待即将使用前取出，用完立即放在 2-8℃储存。

1.6  手动提取按第2部分操作，全自动核酸提取仪按第3或4部分操作。

2.  手动提取

2.1  在离心管中依次加入160 μL Buffer ML、480 μL 步骤 1.5 的上清液、320 μL 异丙醇、 20 μL Magbeads SN，涡旋振荡混匀5 sec后将离心管放于25℃、 1600 rpm的恒温  混匀仪上振荡混匀10 min。

注意： Magbeads  SN加入前需涡旋振荡 20秒使其充分混匀。   Magbeads  SN可与异丙醇按照上述 体积根据样本数量预混然后加入。

2.2  将离心管放于磁力架上静置1   min，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃 去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。

2.3  将离心管从磁力架上取下，加入750 μL Buffer GW1（使用前请检查是否已加入无 水乙醇）后涡旋点震1 min或涡旋振荡5 sec后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪 上振荡混匀2   min（振荡过程中确保Magbeads处于混匀状态）。之后将离心管放 于磁力架上静置1   min，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将 离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。

2.4  重复步骤2.3。

2.5  将离心管从磁力架上取下，加入750 μL Buffer GW2（使用前请检查是否已加入无 水乙醇）后涡旋点震1 min或涡旋振荡5秒钟后放于25℃、 1600 rpm的恒温混匀仪 上振荡混匀2   min（振荡过程中确保Magbeads处于混匀状态）。之后将离心管放 于磁力架上静置1   min，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将 离心管盖上的杂质洗落后彻底弃去溶液（保持离心管固定于磁力架上）。

2.6  重复步骤2.5。

2.7  保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液， 之后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净（肉眼观察磁珠表面变成哑光且磁珠无 干裂）。

2.8  将离心管从磁力架上取下，加入50 -200 μL Buffer EBL。涡旋振荡使磁珠完全悬 浮于洗脱液中后将其放于56℃、 1600 rpm的恒温混匀仪上振荡洗脱10 min，或将 离心管放于56℃水浴锅中孵育10 min，期间每隔3 min涡旋振荡10 sec。

2.9  将离心管放于磁力架上静置2   min，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后用移液 器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

3.   与32通道核酸提取仪匹配

3.1  按下表向96DW深孔板中加入相应试剂。

注意： 

1. 1&7 Colume中试剂按照顺序依次加入。

2. GW1、GW2使用前请检查是否已加入无水乙醇。

3. Buffer GW2与Magbeads SN 可按照上述体积根据样本数量预混，使用前涡旋 10 sec混匀。

3.2  将加入试剂的深孔板和磁套放于32通道核酸提取仪的相应位置，运行提取程序。约40 min后程序运行结束。

3.3  将深孔板6&12列中的洗脱产物转移至1.5 mL离心管中-20℃保存。

4.   与96通道核酸提取仪匹配

4.1  按下表向96DW深孔板中加入相应试剂。

注意： 

1. Plate1中试剂按照顺序依次加入。

2. GW1 、GW2使用前请检查是否已加入无水乙醇。

3. Buffer GW2与Magbeads SN可按照上述体积根据样本数量预混，使用前涡旋 10 sec混匀。

4.2  将加入试剂的深孔板和磁套放于CWE960（磁套置于盘位4）或CWE9600（磁套 置于盘位8）的相应位置，运行提取程序，约50 min后程序运行结束。

4.3  将深孔板Plate 6中的洗脱产物转移至1.5 mL离心管中-20℃保存。

附录：

使用以下方法之一研磨样本：

1.  在涡旋振荡仪上以最大速度手动涡旋振荡10 min。

2.  在搭配有1.5-2 mL水平离心管支架的涡旋振荡仪上以最大速度振荡10 min（让Lysis Tube保持水平放置）。若样本数量超过12，延长5-10 min。

例如使用Scientific Industries或Mobio的Vortex-Genie2 涡旋振荡仪。

3.  使用Qiagen的TissueLyser II时，以25Hz研磨10 min。

4.  使用Qiagen的PowerLyzer   24   Homogenizer时，以2000    rpm    的速度均质化30 sec ，暂停30 sec，然后以2000 rpm的速度再次均质化30 sec。

5.  使用MP Biomedicals的FastPrep-24时，推荐速度为 6.0，时间为 40 sec。