2xPfu MasterMix（Dye），5 ml，阿拉丁

本品为Pfu DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Pfu DNA Polymerase具有5′-3′ DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性，因此在DNA扩增过程中具备纠错能力。与Taq DNA Polymerase相比具有高保真性（Taq酶的6-8倍）和更好的热稳定性。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本产品已加入染料（蓝色），反应结束后可直接进行电泳检测。本产品所含的Pfu DNA聚合酶具有错配率低，耐高温的特点，适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等反应。

质量控制：

经检验无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增多种基 因组中的单拷贝基因；2-8℃存放三个月，活性无明显改变。 

使用方法：

以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实 际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。 

1. PCR反应体系

注意：用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度 0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应 时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2. PCR反应条件  

注意： 

1）Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶 的活性无影响。 

2）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降 低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。 

3）Pfu酶具有3′-5′外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增 片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。 

4）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太 多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。 

5）本产品具有3′-5′外切核酸酶活性，PCR产物为平端不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆 则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。