Super Pfx DNA Polymerase，Enzym

Super Pfx DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶，该聚 合酶具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性。该酶经其他高保真酶改造而来，扩增 能力强、扩增速度快，保真度高，克服了普通Pfu酶扩增能力差、产量低和扩增速度慢 的缺陷，极大地缩短了反应时间。本品可用于长片段扩增及其他各种复杂模板的扩 增，扩增得到的PCR产物的3′端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中，如需进 行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品适用于基因克隆、基因定 点突变、SNP等扩增实验。

活性定义 

在74℃，30分钟内，将10 nmoL脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义 为1个活性单位（U）。 

质量控制

  经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于98%；经检测无外源核酸酶活性； 室温存放一个月，无明显活性改变。 

使用方法

  以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的 片段大小不同进行相应的改进和优化。 

1. PCR 反应体系 

所有操作请在冰上进行，各组分解冻后请充分混匀，用完之后请及时放回-20℃保存。

2. PCR 反应条件 

注意： 

1）优先使用三步法扩增，三步法无法扩增目的产物或引物Tm值大于68°C，请尝试两步法。 

2）变性：简单模板的预变性98℃，30s-1min，对于复杂的模板，预变性时间可延长至3min。 

3）退火：一般实验中退火温度比引物的Tm值低3-5℃，如无法得到理想的扩增效率时，应梯度改变退 火温度，进行优化；发生非特异性反应时，适当提高退火温度。 

4）延伸：延伸时间应根据所扩增片段的长度和模板复杂程度设定，本产品扩增效率为3-5 kb/min，对于 长片段及复杂性高的模板建议2-4kb/min。 

5）循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数，如果循环次数太少，扩增量不足，循环次数太 多，错配机率会增加，所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。