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- 英文名:
Kinase-Glo® Luminescent Kinase Assay
- 供应商:
普洛麦格
- 规格:
10 × 100ml
说 明:
Kinase-Glo® Luminescent Kinase Assays (Kinase-Glo® 激酶发光检测试剂盒 ) 是一种均质的非放射性的方法,用于检测激酶反应后溶液中 ATP 的剩余含量来定量地检测纯化激酶的活性。此试剂盒为多孔板检测模式而设计,是自动化高通量筛选 (HTS) 的理想选择,可被用于检测蛋白质、脂质和糖激酶。整个操作过程只需在激酶的完全反应中加入单一的溶液即可。溶液加入后会产生与 ATP 含量相关的发光信号,而该信号的强弱与激酶的活力成反比。 Kinase-Glo® 试剂盒产生的 " 辉光型 " 发光信号是由专利技术的萤光素酶 (Ultra-GloTMLuciferase) 和独有的缓冲液系统产生的。当在检测时存在激酶反应缓冲液 ( 如 PKA 的反应缓冲液 ) 的情况下, 其发光信号的半衰期超过 5 个小时,因此不需用带有进样器的发光检测仪,可以直接进行批量处理。该试剂盒无论在96孔板还是384孔板分析时都有非常好的Z'-值 ( 通常高于 0.7),可以很容易检测到已知的激酶抑制剂,并且产生的 IC50 值与文献所报道的相当。Kinase-Glo® 检测系统可根据其对 ATP 线性反应的不同进行区
分。最初的 Kinase-Glo® 试剂在 10μM 范围内和 ATP 存在线性关系;Kinase-Glo® Plus 试剂在 100μM 范围内和 ATP 存在线性关系;最新的 Kinase-Glo® Max 检测方法在 500μM 范围内和 ATP 存在线性关系,非常适用于 Km 常数高的激酶的 ATP 检测,也适用于筛选不竞争ATP 结合位点的激酶抑制分子。
特点:
• 可分析多种激酶: 应用范围广,适用于各类激酶 ( 包括脂质、糖和醇激酶 ) 和各类底物 ( 肽、蛋白质、脂质、糖和醇类 )。
• 结果可靠: 发光信号不易受到受试化合物的干扰。无论在 96 孔板还是 384 孔板检测时,都有非常好的 Z' 值 ( 通常高于 0.7)。
• 操作简单: 均质检测,所有反应仅在一个孔中进行。
• 无放射性: 不产生放射性废物和安全隐患。
• 可进行自动化检测: 自动化方法已经经过确证。
• 可定制或批量定购: 详情请联系普洛麦格 ( 北京 ) 生物技术有限公司。
• 筛选非 ATP 结合位点抑制物: 用 500μM 高浓度 ATP(KinaseGlo® Max assay)。
储存条件: 储存于 -20℃。避免反复冻融或者频繁的温度变化。温度的波动将会严重影响产品的稳定性。
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文献和实验C), Roche # 11 017 101 001 Aprotinin 10 mg/mL in PBS (5000-160,000x, aliquot and store -20°C), Roche # 10 981 532 001 PMSF: (phenylmethylsulfonyl flouride, 100x) 0.2 M in ethanol. Store at 4°C. 100x Phosphatase inhibitor mix (store -20ºC
浓缩洗涤液 ( 20ml × 20 倍)× 1 瓶 ( 20ml × 30 倍)× 1 瓶 2-8℃ 保存 样本处理及要求 : 1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心
Immunoprecipitation and Immune Complex kinase assay
per 10 microliters KB. When using an exogenous substrate such as enolase, add the substrate to the ATP mix. 3) Add 10 microliters ATP mix to each IP, pipetting to mix, then incubate at 30°C for 10 min. 4) Stop kinase assay by adding 1 ml of TN + 0.01
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