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- 英文名：
ONE-Glo™ + Tox Luciferase and Cell Viability Assay
- 供应商：
普洛麦格
- 保存条件：
储存条件：将 ONE-Glo™ + Tox 萤光素酶报告基因与细胞活力检测试 剂盒 (ONE-Glo™ + Tox Luciferase Reporter and Cell Viability Assay) 储存于 -20°C。其他组分的储存条件请参考技术手册。
- 规格：
10 Plates
说明：
ONE-GloTM +Tox Assay (ONE-GloTM +Tox 检测试剂盒) 将萤光检测方法与细胞活力标记物结合起来，从而在细胞健康的环境下，更好地理解报告基因的表达情况。该试剂盒采用两步法，只需加入试剂，就可在同一平板的单一检测孔内进行这些检测，而无需进行平行检测。该检测法的第一部分是利用CellTiter-FluorTM 细胞活力检测试盒(CellTiter-FluorTM Cell Viability Assay) 进行的非裂解性荧光检测，用于检测实验处理后细胞群落中活细胞的相对数量。CellTiter-FluorTM 细胞活力检测试剂盒检测的是活细胞蛋白酶的活性，该蛋白酶为保守的组成性表达蛋白，因而可以作为细胞活力的标志物。活细胞蛋白酶活性仅存在于完好的活细胞内，是通过一种可产生荧光并可穿透细胞的多肽底物(glycylphenylalanyl-aminofluorocoumarin，GFAFC)来检测的。该底物进入完整的细胞后，被活细胞蛋白酶切割，产生荧光信号，该信号的强度与活细胞数量相关( 图1)。当细胞膜的完整性丧失并渗漏到周围培养基中后，该活细胞蛋白酶即失活。自由的AFC 荧光基团可用微孔板酶标仪或 CCD 成像仪来检测，激发光波长为380–400nm ，发射光波长为 505nm。该试剂盒的第二部分是利用 ONE-GloTM 萤光素酶检测系统(ONE-GloTM Luciferase Assay System) 定量萤火虫萤光素酶报告基。因在所转入细胞内的表达( 图2)。随系统提供的ONE-GloTM 萤光素酶检测缓冲液(ONE-GloTM Luciferase Assay Buffer) 与ONE-GloTM萤光素酶检测底物(ONE-GloTM Luciferase Assay Substrate) 混合得到ONE-GloTM 试剂(ONE-GloTM Reagent)。ONE-GloTM Assay 含有一种新的萤光素酶底物，使得反应更稳定，对样品组分耐受性更强，比标准的萤光素酶检测试剂产生的异味更少。这些特点使得ONEGloTMAssay 的表现更强劲，并减少了高通量条件时使用其他报告基因检测试剂盒带来的操作不便。发光信号用微孔板酶标仪或CCD 成像仪来检测。
特点
• 得到更多细胞检测相关数据：在同一检测孔内检测细胞活力和萤火虫萤光素酶基因表达。
• 具有更好的生物学意义：在细胞活力环境下，理解报告基因的表达情况。
• 易于操作：该检测法使用简单的“加入- 混合- 读数”模式( 图 3)。
• 灵活，易于自动化：每个检测组分的体积都可以进行扩展，来满足高通量的需求，适于进行高达 1,536 孔板的自动化操作。
储存条件：将ONE-GloTM + Tox 萤光素酶报告基因与细胞活力检测试剂盒(ONE-GloTM + Tox Luciferase Reporter and Cell Viability Assay)储存于-20℃。其他组分的储存条件请参考技术手册。
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文献和实验。实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达，而对照报告基因作为内对照，以使实验报告基因测试的结果归一化。作归一化可消除实验过程中减弱实验准确度的变化，如培养细胞的数量、细胞转染 及裂解的效率等。在研究转录调控启动子活性中，具体实验步骤如下。 1. 质粒转染细胞 1) 细胞 铺板：将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。 2) 转染：16h后转染萤光素酶报告基因 质粒和RNA，每个样品设置6个复孔 a) 配制DNA和转染试剂 : 96孔板转染质粒时
Nature Methods-让胚胎干细胞茁壮成长，一个神奇的小分子配方介绍
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