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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
30
- 英文名:
PAGE Color Rapid Gel Preparation Kit (10%)
- 保质期:
详见外包装
- 供应商:
上海泽叶生物科技有限公司
- 保存条件:
A-D 组分 4℃保存,E 组分-20℃保存
- 规格:
125 gels
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%)
英文名称:PAGE Color Rapid Gel Preparation Kit (10%)
产品货号:S6171
产品规格:125 gels
储存条件:A-D 组分 4℃保存,E 组分-20℃保存,有效期见外包装。
产品组分:

产品介绍:
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%)采用预混液形式的配方,制胶时只需加入改良型促凝剂即可,方便快捷。上层 胶为彩色(紫色)凝胶,便于点样。本产品制备的凝胶也可用于非变性 PAGE 胶电泳实验。 本试剂盒配备改良型促凝剂,无 TEMED 刺激性气味,稳定性好、催化效果佳,制备一块或多块凝胶仅需二十分钟左右。 为方便取用,已开盖的改良型促凝剂可置于 4℃保存至少 3 个月。 制胶数量(125 gels):125 块(0.75 mm);>90 块(1.00 mm);>60 块(1.50 mm)
实验步骤:
1. 根据需要制备的凝胶厚度,取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液,混匀;加入相应体积的改良型促凝剂,混匀。
2. 立即将配制好的下层胶注入玻璃板内,使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可,加入适量水或无水乙醇液 封,待下层胶凝固,约10-15 min(当液封溶液和胶之间可见明显分界线时,说明胶已凝固),倒去上层溶液。 注:1)溶液配制体积是过量的,可留少许于管中,便于观察凝胶状态; 2)室温较低时,凝固速度较慢,需适当延长凝胶时间。
3. 根据需要制备的凝胶厚度,取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液,混匀;加入相应体积的改良型促凝剂,混匀。
4. 立即将配制好的上层胶注入玻璃板中,插入梳子,待上层胶凝固(5-10 min)拔出梳子。
凝胶配制如下:

注:1)尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液; 2)推荐电泳条件:150V,约50 min 或200 V,约35 min。
注意事项:
1. 本产品制备的上层凝胶对样品没有浓缩效应,类似于预制胶,与传统 PAGE 胶相比,蛋白条带分离效果更好,小分子蛋 白(比如 10 kDa)也可以清晰地分离开,且蛋白条带更窄更锐利。
2. 改良型促凝剂的用量可根据个人习惯和经验调整,加入较多的促凝剂可以加速凝胶,反之亦然。同等条件下,温度越高, 凝胶速度越快,温度过高时建议适当降低促凝剂的使用量。
3. 使用前胶溶液及缓冲液恢复至室温,可有效避免凝胶过程中气泡的产生。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
凝胶浓度及分离范围参考:

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文献和实验SDS-PAGE Western Blotting Protocols
cells or fruiting bodies. Klett 100 cells are at a density of 5E8. 2. Pellet at RT for 1-2’ and remove s/n. 3. Extract protein by SDS/Urea Method, TCA-precipitation, or sonication. 4. Measure [protein] by Bradford (use 1-2 ul of each sample
操作篇:western blot 之 SDS-PAGE 电泳
20-50μl 蛋白(注意:根据自己的实验需要进行选择,没有固定的量)的溶液体积即为上样量。 取出上样样品至 200μl 的 EP 管中,加入 5×SDS 上样缓冲液至终浓度为 1×。(上样总体积一般不超过 15μl,加样孔的最大限度可加 20μ 样品,其实大一点的垂直电泳槽每孔最大上样量可以达到 40μl,胶做得很好的话 50μ 也是问题不大的)上样前要将样品于沸水中煮 5-10 min 使蛋白变性。 本人心得:可以使用 PCR 仪进行变性,加快速度,这样就不用将水煮
完整蛋白质从 SDS-PAGE 胶中的电洗脱及其 MALDI-TOF MS 分析
1. 前言 基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 已经被广泛应用于生 物科学中。结合十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE ) 和酶解消化,它提供了一种通过肽质量指纹谱(PMF ) 的快速、灵敏和准确鉴定蛋白质的方法通常 PMF 给出 10%~40% 的序列覆盖率。这样的覆盖率对于蛋白质鉴定来说已经足够,但它可能还不足以用来区分高度相似的蛋白质异构体。蛋白质异构体/同工酶广泛存在,它们通过 mRNA 的可变剪切或多基因家族生成。虽然它们在细胞中催化
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