NGS建库分子酶——无甘油T4 DNA聚合酶 I Kleno

Meridian迈迪安近日全新推出了一系列无甘油NGS建库分子酶，可以实现冻干常温储运，简化运输物流，不仅减少包装材料和运输成本，而且还能减少冷链储运造成相关的碳排放，符合迈迪安坚持为体外诊断开拓可持续性创新原料的战略。

 

该系列酶以高浓度形式，满足了POC设备对微型化的要求。通过使用更小的反应体积量，最大化上样量的同时，确保性能的一致性，提高检测林敏度。迈迪安的新型无甘油高浓度酶进一步助力NGS研发人员设计下一代 POC NGS检测。

 

除此以外，迈迪安还可以为特定的 NGS 应用定制冻干试剂，根据需要提供冻干球定制服务。

Meridian生命科学部门总裁Lourdes Weltzien博士说：“在 Meridian，产品创新背后的驱动力是我们对理解和减轻客户挑战的坚定承诺。随着我们全新无甘油NGS酶产品系列的推出，消除客户在处理NGS应用关键原材料时遇到的物流障碍，旨在助力IVD企业能够在全球范围内提升和拓宽他们的NGS能力。”

 

总结来说，此次迈迪安推出的全新NGS酶产品主要优势包括：

• 不含甘油，可兼容冻干，在常温下储运 

• 高浓度，适用于POC便携式NGS测序设备 

• 最大限度地增加上样量，提高灵敏度

   

该系列分子酶覆盖了NGS建库的各个阶段，具体包括：

 

1. T4 DNA 聚合酶 I Klenow大片段

T4 DNA 聚合酶I Klenow大片段是来自大肠杆菌DNA 聚合酶 I 的蛋白水解产物。该酶由大肠杆菌表达，表达基因的来源为polA 基因片段。T4 DNA聚合酶I Klenow大片段酶活性：

1. 5'→3'DNA聚合酶活性：可以在结合有引物的单链DNA 模板上，催化将核苷酸添加到 DNA 链的 3' 末端，使其沿 5' 至 3' 方向延伸。

2. 3'→5'外切酶活性：可以用于将5'端突出末端补平或3'端突出末端削平。T4 DNA聚合酶的3'→5'DNA外切酶活性对于单链DNA要比双链DNA活性更高，即单链DNA要比双链DNA中的非配对链部分更容易被T4 DNA聚合酶所消化。

3. 无5'→3'外切酶活性

 

T4 DNA聚合酶I Klenow大片段主要用于：

1. DNA 5'或3'突出末端的钝化

2. 5' 突出端进行标记

3. 定点突变过程中第二链的合成

4. 不依赖于连接反应的PCR产物克隆

5. 通过置换反应进行标记DNA探针合成

 

在NGS文库制备中T4 DNA聚合酶主要作用是对DNA进行片段化处理后用于末端修复，可钝化双链 DNA 片段的 DNA 末端（填充5'-overhangs 或/和去除3'-overhangs ），以便随后通过 T4 DNA连接酶添加适配子。

 

T4 DNA聚合酶I Klenow大片段的最*优反应温度是25°C或室温。75°C加热10分钟可使酶失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对其有抑制作用。 

 

迈迪安的MDX208无甘油T4 DNA聚合酶I Klenow大片段提供优化的5x反应缓冲液，缓冲液中含有冻干所需的辅料，提供出色、稳定的性能。

 

该酶以50U/μL提供，远远高于其他同类产品（通常为5-10U/μL），高浓度分子酶适用于开发新一代POC NGS检测，以满足便携、小型化需求。