免疫荧光（三标/四色）

原理介绍: 酪酰胺信号放大(TSA， Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶 ( HRP) 对靶蛋白进行标记的酶学检测方法， 类似常规免疫组化的 DAB 显色方法 ， TSA 技术同样采 用 HRP 标记的二抗， 同样有对应的 “显色”步骤 (HRP 催化加入反应体系的酪胺荧光素底物， 产生 活化荧光底物， 活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合， 使样品上稳定的共价结合酪胺荧光 素。之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP 复合物， 重复下一种一抗-hrp二抗来第二轮孵 育， 换另一种酪胺荧光素底物， 如此往复就可实现多重标记。

　　TSA 详细原理是利用酪胺 Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在 HRP 催化 H202 下形成共价键结合位点)， 产生大量的酶促产物， 该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、 组氨酸和酪氨酸残基)结 合， 这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积， 结果使其检测信号得到 10-100 倍增强。 简单 来说， 用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的 HRP (而不是直接偶联荧光素) ， 来催化后续 添加入体系的非活性荧光素。 荧光素在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化， 跟临近蛋白的酪氨酸残基 共价偶联， 使得蛋白样品与荧光素稳定结合。 然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理， 前一轮非共价 结合的抗体被洗掉， 共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。 再换个一抗来第二轮孵育 ， 周而复始。 等到所有抗体孵育结束， 荧光素都结合好后， 最后去检测结果。 由于每次体系中都只有单 一抗体孵育， 因此无需担心抗体交叉反应， 以及一抗二抗种属匹配问题， 大大减少了实验设计时不同 种属抗体选择匹配的限制。 也就是说， 如果用 TSA 技术， 同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性 高的兔单克隆抗体。 搭配同一支抗兔的 HRP 二抗就可以进行实验， 而且信号放大的倍数大大增强。 本公司开发的试剂盒具体酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种： 480， 520， 570 ， 620， 690， 780。 此试剂盒中的荧光染料可单独或配合使用。 可以实现单标、 双标、 三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光标记等功能， 极大丰富了此试剂盒的内涵。