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- 详细信息
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- 保存条件:
常温
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见标签
- 英文名:
Collagenase II
- 库存:
现货
- 供应商:
联硕生物
- CAS号:
9001-12-1
- 规格:
1G
胶原酶Ⅱ适用于脂肪、肝脏,骨,甲状腺,心脏和唾液腺组织细胞的分离。来源于溶组织梭菌。
胶原酶Ⅱ可以用 TESCA buffer (50 mM TES,0.36 mM 氯化钙,pH 7.4,37°C)(Cat:G0150)配制成 1-2 mg/ml。 也可以用含钙镁的 PBS、含钙镁的 hanks 或不含血清的培养基配制。配完后分装,避免反复冻融。
1个胶原消化单位(CDU):在 pH 7.4,37℃以及钙离子存在的条件下,以每5小时从胶原中 释放的多肽相当于茚三酮显色1微摩尔亮氨酸量为一个活性单位。 1FALGPA 单位:在 pH 7.5、25℃以及钙离子
存在的条件下,一个 FALGPA 水解单位每分钟 可水解 1.0µmol 呋喃基丙烯酰基-Leu-Gly-Pro-Ala。
胶原酶Ⅱ为粗品,用于分离脂肪细胞,也可以用于分离各种组织、肿瘤,尤其是上皮组织。外 观为黑棕色粉末。分子量68,000到125,000,最适PH为6.3-8.8。胶原酶能够特异性结合 -R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-序列中的中性氨基酸(X)和甘氨酸之间的肽键。该粗品是溶组织梭菌分泌的 混合酶。主要为胶原酶、中性蛋白酶和梭菌蛋白酶。其中梭菌蛋白酶是被氧化的、最不活泼的酶, 组织的分离必须依靠胶原酶和中性蛋白酶两者共同作用。
激活剂:Ca2+,每摩尔酶需要4g钙离子激活。
抑制剂:EGTA、还原性谷胱甘肽、β-巯基乙醇、巯基乙/酸钠、8-羟基喹/啉、2,2'-联吡啶等。
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文献和实验时间不宜超过 2min。 25、将细胞悬液转移至 15ml 离心管中,加入 10ml 预冷的 DMEM/F12 培养基(含 10% FBS)。4℃ 条件下 220g 离心 5min,取细胞沉淀。 26、将所得细胞重复 8-12 步骤,完成 OC 类器官复苏。 图 2. OC 类器官的不同形态表型。即致密(左),囊性(中)和低内聚(右)型 OC 类器官。比例尺 200 μm【4】。 卵巢癌类器官样本来源不局限于活检样本或手术样本,腹水和胸腔积液中的癌细胞也同样可以用于构建 OC 类器官。培养
, 1% BSA 和 0.035% NaHCO3),进行流式分选细胞。 11、分选出的阳性细胞(约 5,000 个)种在 V 型底低吸附的 96 孔板中,210 × g 离心 4 min。 12、将细胞用 Step5 培养基换液,培养 54h。 13、将细胞转移至含有 Step6 的培养孔中,培养 48h。 14、将细胞转移至含有 Step7 的培养孔中,培养 72h,形成 UB 球体。 诱导输尿管芽(Ureteric bud, UB)分枝形成 15、将 UB 球体转移至 24 孔 Transwell 中
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