- ￥1595
- 翌圣生物（Yeasen）
- 36421ES40
- 上海翌圣
- 2026年02月05日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
充足
- 英文名：
rProtein A/G IP/Co-IP Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 保存条件：
Part Ⅰ-25~-15℃保存；Part Ⅱ2~8℃保存
- 规格：
40T
rProtein A/G免疫沉淀磁珠使用“纳米表面生物技术”(S-TEC)，将rProtein A/G高密度定向包被到粒径为200 nm的纳米磁珠表面，纳米级磁珠提供的超大比表面积，具有更多的结合位点、更高的抗体结合能力和极低的蛋白非特异性吸附率。蛋白A/G免疫（共）沉淀试剂盒配有经过优化验证的必要试剂，为免疫（共）沉淀实验提供了最佳的反应条件，增强了免疫（共）沉淀实验的稳定性。本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫（共）沉淀反应。
天然蛋白A（Protein A）是一种发现于金黄色-葡萄球菌的细胞壁表面蛋白，天然蛋白G（Protein G）是一种分离自G型或C型链球菌属的细胞表面蛋白，二者功能相似，主要通过与免疫球蛋白（Ig）的Fc区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG，但在两者结合特异性上有所不同。rProtein A/G免疫磁珠同时共价偶联了蛋白A和蛋白G，比单独的蛋白A或者蛋白G都有更广的结合范围，实用性更高。同时，本品使用的是基因改造后的蛋白A和蛋白G，不仅维持其本身的Ig亲和特性，同时也去除了天然蛋白本身的非主要结合域以降低非特异性结合。
产品信息
| 类别 | 编号 | 组分名称 | 36421ES40（40T） | 保存方式 | 翌圣货号 |
| Part Ⅰ | 36421-A | Lysis Buffer for IP Assays 免疫沉淀用(IP)裂解液 |
100 mL | -25~-15℃ | 20118ES |
| 36421-B | 蛋白酶抑制剂Cocktail,EDTA-free,100×DMSO储液 | 1 mL | -25~-15℃ | 20124ES | |
| 36421-C | Mouse IgG(1mg/mL) | 25 uL | -25~-15℃ | 36111ES | |
| 36421-D | Rabbit IgG(1mg/mL) | 25 uL | -25~-15℃ | 36113ES | |
| 36421-E | 5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液 | 1 mL | -25~-15℃ | 20315ES | |
| Part Ⅱ | 36421-F | rProtein A/G MagBeads (IP Grade) | 1 mL | 2~8℃ | 36417ES |
| 36421-G | 1x TBS Buffer，TBS 缓冲液(粉末)，PH 7.4,1L | 1 L | RT | 60157ES | |
| 36421-H | 洗脱缓冲液 | 5 mL | 2~8℃ | N/A | |
| 36421-I | 中和缓冲液 | 1 mL | 2~8℃ | N/A |
储存条件
Part Ⅰ-25~-15℃保存；Part Ⅱ2~8℃保存；有效期1年。
Part Ⅱ中的rProtein A/G MagBeads (IP Grade)，避免冷冻。
使用说明
工作液浓度应根据具体实验确定，建议进行预实验摸索最佳实验浓度。
- 缓冲液配制
平衡/结合/洗杂缓冲液：1x TBS Buffer，TBS 缓冲液(粉末)，PH 7.4,1L（36421-G）, 使用时用蒸馏水或超纯水溶解，定容至1L即可。
洗脱缓冲液：洗脱缓冲液（36421-H）可直接使用。
中和缓冲液：中和缓冲液（36421-I）可直接使用。
SDS-PAGE Sample Loading Buffer (1X)的配制：取适量SDS-PAGE Sample Loading Buffer (5X)（36421-E）用水稀释5倍即为SDS-PAGE Sample Loading Buffer (1X)。
- 抗原样品制备
血清样品处理：若目标蛋白丰度较高， 建议用结合缓冲液稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10-100 µg/mL，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的最终浓度为1×）。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
贴壁细胞样品处理：移去培养基，用PBS清洗细胞两遍；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5mL EP管内，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的最终浓度为1×）。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
大肠杆菌样品处理： 离心收集大肠杆菌（4℃, 12000g, 2 min），弃上清后称重， 按每克（湿重）菌体10 mL的比例用1×PBS洗涤2次；按每克（湿重）菌体5-10 mL的比例加入结合缓冲液，同时加入蛋白酶抑制剂Cocktail，重悬菌体，超声裂解细胞，离心收集上清（4℃, 17000g, 10 min）。
- 磁珠预处理
- 将磁珠漩涡振荡1 min，使其充分混悬；
- 取25 µL磁珠悬液置于1.5 mL EP管中，放置在磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃保护液。
- 加入200 µL结合缓冲液洗涤，进行磁性分离，吸弃上清，重复1次。
1) 加入目标抗体溶液（2-10 µg抗体总量），充分混匀。
2) 室温孵育 10 min，可以振荡或漩涡混合均匀。
3) 将EP 管置于磁分离器上，待磁珠全部吸附后，吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。
4) 加入500 μL 洗杂液混合均匀，置于磁分离器上，待磁珠全部吸附后，吸弃上清液。重复洗杂至少 3次。
可选做：使用抗体种属相同的正常IgG配制相同稀释比或终浓度的正常IgG工作液，以用于去除非特异性结合或作为阴性对照。所谓种属相同的正常IgG是指，例如后续免疫沉淀时用的抗体是小鼠IgG，则在本步骤中可以用TBS稀释适量的Mouse IgG等以用于降低背景或作为阴性对照。
5. 抗原结合反应
1) 加入含有抗原的样品（通常300-500 μL，每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为 500 ~1500 μg)，用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。
2) 在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管 10 min，使抗原与抗体充分结合，如结合力较弱则可在室温下反应1h或者在4℃下反应过夜。
3) 上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离，收集上清液，以备后续检测。
4) 向离心管中加入1 mL洗杂液，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然后进行磁性分离，弃上清液；从磁分离器上取下离心管，再重复洗涤两次。
6．抗原洗脱
A. 变性洗脱 此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。
1) 从磁分离器上取下离心管，向其中加入80~100 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀， 95℃加热 5min。
2) 置于磁性分离器上，进行磁性分离，收集上清液进行SDS-PAGE检测。
B. 非变性洗脱
1) 向磁珠-抗体-抗原复合物中加入100 μL洗脱液，混合均匀，室温孵育10 min。
2) 置于磁性分离器上，进行磁性分离，收集洗脱液至新的 EP 管中。
3) 重复步骤 1）和2），收集洗脱液，与2）中洗脱液混合，加入中和液中和至 pH7.0-8.0。
注意事项
1. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。
2. 本试剂盒提供的Lysis Buffer for IP Assays经反复测试，适合很多情况下的免疫沉淀或免疫共沉淀时的样品裂解和后续的洗涤。但 IP 实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到 Lysis/Wash Buffer 的影响，因此可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验。
3. 本产品仅作科研用途。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
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文献和实验制备的细胞裂解液上清去进行抗体-agarose beads孵育实验。抗体可以先加入上清中与样品孵育数小时后再加入Protein A或者G beads孵育过夜，也可以同时加入抗体和Protein A或者G beads孵育过夜。 一般选择1mg总蛋白（1mg/ml）对应添加1 ug 抗体，最高可以添加至5 ug 抗体，过多的抗体会产生假阳性。这个步骤中关键因素在于选择合适的阴性对照。一般选用加同样量的IgG，但更为妥当的方法是选择针对胞内其它无关目的蛋白的一抗做对照。 例如，做膜蛋白A的免疫沉淀
糖凝胶上检测分析。如图一所示 图一：2.2 超声破碎后，8000g，30秒，4°C,离心。将上清移入新的管子中。开始准备进行染色质免疫共沉淀（IP）。2.3 每份超声样品取50ul，这时的样品标记为INPUT，用于定量DNA浓度和作为PCR的空白对照。超声后的染色质应立刻冻入液氮中或者储存于-70°C可储存2个月。避免多次反复冻融。3检测DNA浓度1INPUT样品用于为后来的IP样品计算DNA浓度。DNA可采用PCR纯化试剂盒（加入70ul洗脱液，接着进入3.2a）或者采用酚/氯仿抽提（加入350ul
2.55， SDS-PAGE 上样缓冲液 (pH 6.8)： 2% SDS, 62.5 mM Tris 碱, 10% 甘油, 2-5% 2-巯基乙醇,步骤：1， 用50 µl免疫沉淀缓冲液溶解抗原，向溶液中加入1倍过量的特异性一抗。加入免疫沉淀缓冲液至样品体积为0.2 ml。一般情况下，在此体积下2-5µg的纯化抗体能够较好地形成抗原抗体复合物。2， 样品4°C.孵育过夜。3， 将适量的蛋白A或蛋白G加到抗原抗体复合物中(~ 50 µl of gel per 5 µg of antibody
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