- ￥2800 - 6200
- 上海研生
- YS-01X8001
- 国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 肿瘤类型：
否
- 供应商：
上海研生
- 库存：
47
- 生长状态：
贴壁
- 是否是肿瘤细胞：
否
- 细胞形态：
长梭形细胞，不规则细胞
- 物种来源：
兔
- 组织来源：
眼球
- 规格：
5×10⁵Cells/T25培养瓶
| 细胞名称 | 兔结膜成纤维细胞 | 组织来源 | 眼球 |
| 商品货号 | YS-01X8001 | 种属来源 | 兔 |
| 包被条件 | 换液频率 | 每2-3天换液一次 | |
| 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 长梭形细胞，不规则细胞 |
| 传代特性 | 根据细胞特性 | 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 培养基 | 原代成纤维细胞培养体系 | 培养条件 | 气相：空气，95%；CO2，5% |
| 细胞简介 |
| 结膜松弛症（conjunctivochalasis，CCh）是由于球结膜过度松弛和（或）下睑缘张力高，造成松弛球结膜堆积在眼球与下睑缘、内外眦部之间，形成皱褶，引起眼表泪液分布异常，并伴有眼部不适如流泪、干涩、异物感等症状的眼病。有研究表明结膜松弛症中结膜成纤维细胞的改变，影响细胞外基质成分的平衡状态和稳定性，可能是结膜松弛症发生的原因。 |
质量检测：实验室分离的兔结膜成纤维细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
兔结膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
兔结膜成纤维细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈长梭形细胞，不规则细胞 ，在技术部标准操作流程下，细胞可传2-3代；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，
37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度
的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内
加入5ml完全培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验
器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL
（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
原代细胞培养方法及注意事项：
1.准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3.处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4.剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。
7.计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
8.培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶盖需拧松半圈。
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文献和实验较简单；但容易产生杂质如成纤维细胞等，成纤维细胞生长快，故培养之细胞质量较差；培养的大多数细胞无收缩性；且原代细胞的获得需3~4周，获得大量平滑肌细胞耗时长（17）。既往酶消化法较组织块法复杂、精细；适宜的酶浓度和培养时间的确定较为困难；然而在较短时间内可获得大量的平滑肌细胞，1996年有学者报道（Chambers（18）等）酶消化法纯度为70%。可见一种快速、高效、高纯度的酶消化法培养膀胱平滑肌的方法显得尤为重要。 本实验研究两只兔所有标本均获成功。倒置显微镜观察平滑肌细胞24小时均可见膀胱平滑
家兔出血性败血症，又叫巴氏杆菌病，流行于冬春季，特别是春季。 病兔症状急性表现为精神极差，不吃，呼吸急促，体温在41℃以上，鼻孔流涕，有时腹泻，临死前体温下降，有发抖、痉挛、瘫痪等现象，12～48小时内死亡。 慢性病初鼻孔内有水样分泌物，偶或打喷嚏，以后分泌物变稠，逐渐在鼻孔周围形成硬壳。这时病兔呼吸困难，有时并发脓性眼结膜炎、皮下脓肿、中耳炎或乳腺炎等，最后消瘦而死。 防治：注意饲管，发现病兔及时隔离。 用药： ①肌注链霉素，每日按每千克体重0.5～1万单位，分2次注射，连用5天
控制病原带入兔群和污染饲料外，注射兔瘟灭活疫苗可有效的预防本病的发生。除有特殊要求的试验兔外，不论大小兔每只颈背部皮下注射1ml，5￣7 天后可产生免疫力，免疫期6个月。二、巴氏杆菌病巴氏杆菌病（Pasteurellosis）是出血败血性巴氏杆菌（Pasteurella multocidda）所引起的各种兔病的总称。家兔对这种病菌非常敏感，不分品种和年龄均易感染，常引起大批死亡。在临床上主要有传染性鼻炎、地方流行性肺炎、中耳炎、结膜炎、子宫积脓、睾丸炎和脓肿等，亦可引起败血症致死。1. 病原出血
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