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文献和实验Combined 3C-ChIP-Cloning (6C) Assay: A Tool to Unravel Protein-Mediated Genome Architecture
per immunoprecipitation. Rotate end-over-end overnight at 4°C. 25. Prepare the magnetic beads: i. Mix Protein G-conjugated beads:Protein A-conjugated beads (1:3) in a 1.5-mL tube. Each immunoprecipitation experiment
;3. 用等体积酚/氯仿/异戊醇抽提样品,1700×g,离心 10 min。如果样品溶解得不好,再加 1 体积不含蛋白酶 K 的消化缓冲液,重复离心。如果在界面上有一层厚的白色物质,重复抽提一次,将上层 (水溶液) 转移至一个新离心管中;4. 加入 1/2 体积 7.5mol/L 乙酸铵和 2 倍体积 100% 乙醇,12 000 rpm 离心 2 min;5. 用 70% 乙醇洗涤,晾干,沉淀用 TE 缓冲液或无菌双蒸水重新溶解, 使终浓度在约 1 mg/mL。注: 加入 0.1% 的 SDS 和 1? 滋
了β-半乳糖苷酶活性,在x-gal 和ITPG存在的生色诱导培养基上只能形成白色菌落。所以在含x-gal 和ITPG 的选择性培养基上长出的白色菌落,初步可以认为是重组转化子。为了防止假阳性的出现,需要通过重组子质粒的抽提,经EcoR I和HindIII 双酶切,凝胶电泳进一步鉴定,看是否酶切为原来的载体pUC18 质粒和PCR产物的分子量图谱。如果是,则认为新构建的质粒已重组成功。当然最好的鉴定方法是通过测序来确认。三、材料、试剂与器材1.高速离心机、微量移液器、1.5ml EP管2.Rapid
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