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- 2025年07月16日
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文献和实验抗生素的LB加入到容量为15ml 并通气良好(不盖紧)的试管中，然后接入一单菌落，于30℃剧烈振摇下培养过夜。 2)将1.5ml培养物倒入微量离心管中，用微量离心机于4℃以12000g离心30秒，将剩余的培养物贮存于4℃。 3)吸去培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。除去上清的简便方法是用一次性使用的吸头与真空管道相连，轻缓抽吸，并用吸头接触液面。当液体从管中吸出时，尽可能使吸头远离细菌沉淀，然后继续用吸头通过抽真空除去附于管壁的液滴。 2.碱裂解法 1)将细菌沉淀，所得重悬于100μl用冰预冷的溶液
烷基硫酸钠（SDS）；三羟甲基氨基甲烷（Tris）；乙二胺四乙酸（EDTA）；饱和酚；氯仿；异戊醇；无水乙醇；75%乙醇；蛋白酶K；RNase酶；手术剪刀、镊子、吸水纸；微量取液器；研钵、1.5mL 离心管、一次性手套、1.5mL离心管架、记号笔…… 试剂配制 1．Tris-HCL 1mol/L PH8.0 50ml 配制方法：40ml双蒸水，6.057g固体Tris放入烧杯中溶解，用浓盐酸调PH值到8.0，转移到50ml容量瓶中，加入双蒸水定容，摇匀后，转到准备好的输液瓶中，贴上标签，高压灭菌后，降至室温
糖珠用 1 ml 裂解缓冲液洗 3～4 次；最后加入 15 μl 的 2 × SDS 上样缓冲液，沸水煮 5 分钟。 6. SDS-PAGE，Western blotting 或质谱仪分析。 三、通过免疫共沉淀确定结合蛋白 1. 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到 1 ml 冰冷的 EBC 裂解缓冲液中。 2. 将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离心机上 4 ℃ 以最大速度离心 15 min。 3. 收集上清（约 30 ml）并加入 30 μg 的适当
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