- ￥2340
- 西格
- XG-P2993
- 国产
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
24
- 保质期：
3 年
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
500U
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2993 | 3173 DNA Polymerase(5U/ul)) | 500U |
描 述 ：
3173 DNA Polymerase为来源于病毒的热稳定型DNA 聚合酶，通过点突变修饰，使其3’-5’外切活性缺失（exo-形 式）而获得更佳的扩增活性。该酶除了具有依赖于DNA的聚 合酶活性，还具有依赖于RNA的逆转录活性，因此可用于单 管RT-PCR扩增。该酶具有强烈的链置换活性，可用于DNA 或RNA的等温扩增。在以RNA为模板的LAMP实验中，可实 现单酶系统反应。对于有复杂二级结构的RNA模板，可通过 92度加热3s来得到好的扩增效果，而Bst pol在此温度加热后 导致扩增活性丧失。 该酶搭配两种 Buffer：10×3173 Isothermal Buffer 和 5×Best PCR Buffer。10×3173 Isothermal Buffer 用于恒温 PCR 扩 增，其反应温度不能超过 70°C。5×Best PCR Buffer 用于常 规 PCR 扩增扩增，94°C 预变性时间不可超过 5min。
单位定义：
一个活力单位即在 65°C 条件下，30 分钟内催化 25nmoldNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
储存：-20℃可保存 3 年。
PCR反应基本步骤：
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)：
在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension)：
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂？
一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；
二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；
三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；
五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；
六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；
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文献和实验or cosmid DNA of interest into a 12 X 75 mm Falcon tube containing 2 ml of LB media supplemented with the appropriate antibiotic (typically ampicillin at 100 ug/ml) and incubate at 37deg C 8-10 hours with shaking at 250 rpm. Transfer the culture
reaction in a microcentrifuge tube: 750ng M13 template DNA 2ul Bst reaction buffer 2ul Bst nucleotide extension mix 1ul oligonucleotide primer (2.5ng/ul) 0.5-1ul [alpha]-32-P-dATP or [alpha]-35-S-dATP 1ul diluted Bst polymerase (0.1U
template/primer of 2ul 1 x labelling mix, 1ul 300mM DTT, 1ul [a-35S]-dATP (~ 1000Ci/mmol) and 3 units T7 DNA polymerase (2ul of a 1.5 units/ ul solution). The solution is pipetted briefly to mix the components and incubated at 4℃ for 2-5 minutes
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