2XT4 DNA Ligase

公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断！

货号	产品名称	规格
XG-P2943	2XT4 DNA Ligase	20 次

产品概述：
DNA连接是一种常用的分子生物学实验方法。T4 DNA 连接酶是使用最多的连接酶。2×T4 DNA Ligase Master Mix是一种高效的T4 DNA连接酶预混型试剂，包含了T4 DNA 连接酶、连接缓冲液及连接促进剂等成分，只需要往DNA混合液中加入等体积的2×T4 DNA Ligase Master Mix即可完成连接反应。
该产品在-20℃不会冻结，无需长时间的化冻过程，使用非常简便。DNA片段在连接酶的作用下短时间便可发生高效连接。本产品应用于粘性末端、平滑末端双链DNA连接及TA克隆等。
保存条件：-20℃保存。
注意事项：
1.本试剂在-30℃以下温度长时间保存时可能会产生冻结，但经试验证实，溶解后不影响连接活性，反复冻融多次不影响其活性。
2.T4 DNA ligase需要Mg2+为激活剂，因此螯合Mg2+的EDTA的存在会阻碍连接反应。溶解于高浓度EDTA缓冲液的DNA需要用灭菌水或TE缓冲液进行置换。

PCR反应基本步骤：
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)：
在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension)：
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。

PCR 反应需要使用哪些试剂？
一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；
二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；
三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；
五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；
六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；

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