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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
43
- 保质期:
12 个月
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
2-8°C
- 规格:
2500次(250ul×50支)
公司产品仅供科研研究使用、不得用于临床诊断!
PCR反应基本步骤:
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
变性(Denaturation):
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling):
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension):
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂?
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
公司供应的相关产品:
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2872 | Prestained DL5000 DNA Marker(含6×DNA Loading buffer with GelRed)分子量标准 | 2500次(250ul×50支) |
PCR反应基本步骤:
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
变性(Denaturation):
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling):
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension):
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂?
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
公司供应的相关产品:
| 组链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 血小板衍化生长因子BBELISA试剂盒 PDGF-BB免费代测试剂 |
| 异尖线虫属探针法荧光定量PCR试剂盒 | ATP结合盒转运蛋白G1ELISA试剂盒 ABCG1免费代测试剂 |
| 肉芽肿鞘杆菌PCR检测试剂盒 | 肾上腺髓质素2ELISA试剂盒 |
| 牛肠杯状病毒PCR检测试剂盒 | B-黑色素瘤抗原2ELISA试剂盒 |
| 丙型肝炎病毒3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | CD7分子ELISA试剂盒 |
| 枳实探针法PCR鉴定试剂盒 | CopineⅨ蛋白ELISA试剂盒 |
| 猪高致病性蓝耳病毒RT-PCR检测试剂盒 | Dachsous2蛋白ELISA试剂盒 |
| 鼻血吸虫PCR检测试剂盒 | D-氨基酸氧化酶ELISA试剂盒 |
| 比氏肠微孢虫探针法荧光定量PCR试剂盒 | Fidgetin蛋白ELISA试剂盒 |
| 猪弓形虫PCR检测试剂盒 | Hepsin蛋白ELISA试剂盒 |
| 白鲜皮染料法PCR鉴定试剂盒 | 鸡免疫球蛋白G(IgG)ELISA检测试剂盒 |
| 致病性大肠杆菌(EPEC)PCR检测试剂盒(荧光-PCR法) | 人肝细胞生长因子(HGF)试剂盒elisa |
| 羊源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | Prestained DL5000 DNA Marker(含6×DNA Loading buffer with GelRed)分子量标准人主要组织相容性复合体,II类,DQα2(HLA-DQA2)ELISA试剂盒 |
| 禽致病性大肠杆菌血清型PCR检测试剂盒 | 大鼠促生长激素释放激素(GRH)ELISA试剂盒 |
| 唇饰带线虫PCR检测试剂盒 | 大鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA检测试剂盒 |
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Prestained DL5000 DNA Marker(含6×DNA Loading buffer with GelRed)分子量标准
¥8112









