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46
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12 个月
- 供应商:
上海西格
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-20℃
- 规格:
500U
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P2806 | Taq Plus DNA Polymerse(5U/ul) 高产量聚合酶 | 500U |
制品说明:
Taq Plus DNA Polymerase 是Taq DNA Polymerase与Pfu DNA Polymeraser 混合物。在PCR反应中Taq Plus DNA Polymerase延伸速度为1-2 kb/min,产物3′端带A,可直接用于TA克隆,若需提高克隆效率,建议先纯化加A后进行TA克隆。
酶贮存缓冲液:
20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1 mM EDTA, 1mM DTT, 100 mM KCl, Stabilizers, 50% glycerol。
5×Taq Plus Buffer (含Mg2+):
100 mM Tris-HCl (pH 8.4), 100 mM KCl, 50mM(NH4)2 SO4,7.5mM MgCl2,其他成分。
适用范围:一般用于DNA片断的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等,产物可以直接用于TA克隆。
PCR反应基本步骤:
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
变性(Denaturation):
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling):
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension):
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂?
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
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文献和实验Pfu、KOD、Phanta 等,普通聚合酶 Taq 等。 面对如此之多的选择,大多数刚进实验室的新生们默默表示,选择恐惧症,犯了…… 那么,解决的方法是,根据实验目的选择合适的 DNA 聚合酶。比如:常规的 PCR 扩增和菌液鉴定,长度小于 5kb 的片段,保真度要求不高,使用 Taq 酶扩增即可。选用 Mix 的形式,混样更加简单,操作更加便捷。如果混样泡沫多,想灭掉泡沫的话,推荐大家使用 Green Taq Mix。想要获得较高的产量,可以选择 Taq Plus DNA 聚合酶,相
DNA聚合酶Taq Plus和 Taq Plus I 有什么区别吗?对PCR结果有影响吗? Taq Plus 集扩增效率高和保真度好于一体。能有效地扩增10 kb以下的片段,扩增效率比Pfu高,保真度 Taq Plus 比Taq好。对于有些结构复杂的模板,如GC含量高、有二级结构等可选用Taq Plus扩增。 Taq
Fast Taq DNA Polymerase都能做到!产品特点:1. 超快速DNA合成(10-15 s/kb)。2. 大幅度提高保真性,约为Taq 酶的3倍,接近Pyrococcus furiosus DNA聚合酶(Pfu)的水平。3. 高退火温度。在比Tm值高3 °C的条件下,引物仍能有效与模板配对结合,有效打开二级结构,避免引物二聚体的形成,提高扩增特异性和效率。4. 能够从含抑制剂较多的模板直接扩增。5. PCR 产物3’末端有一个“A”碱基,可以直接用于T-载体连接克隆
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