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90天
- 英文名:
pOTB7-GPR132(前5bp不一样)
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100
- 供应商:
科淼生物
- 规格:
0.5ug/0.5ug
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 0.5ug | 产品价格: | ¥1280.0 |
英文名称:pOTB7-GPR132(前5bp不一样)
货号:KM1027198
图谱:微客服
宿主:大肠杆菌
用途:基因模板
片段类型:cDNA
片段物种:人
原核抗性:Chl
真核抗性:
荧光标记:
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文献和实验1. 质粒载体构建不成功(目的片段和载体不能成功连接)的常见原因分析 ①DNA 片段纯度差:体系中的杂质会降低连接效率,如果使用不纯化直接连接的方法一直无法成功构建载体,可以考虑进行纯化后再进行连接; ②目的片段和载体片段使用比例悬殊,或者用量过多或过少:目的片段和载体的摩尔比需要控制在一定范围之内,否则会影响连接效率,具体比例可以草靠连接酶说明书; ③连接条件不当:比如连接时间不足、温度不合适、酶失活等,可以通过设置对照组来排查原因; ④引物设计问题:比如通过无缝克隆的方式进行连接,同源
1.1 利用启动子探针载体筛选启动子启动子探针型载体是一种有效、经济、快速分离基因启动子的工具型载体,包含2个基本部分:转化单元和检测单元。其中,转化单元含复制起点和抗生素抗性基因,用于选择被转化的细胞;检测单元则包括1个已失去转录功能且易于检测的遗传标记基因以及克隆位点。利用启动子探针载体筛选启动子的过程为,先选用1种适当的限制性核酸内切酶消化切割染色体DNA,然后将切割产生的DNA限制片段群体与无启动子的探针质粒载体重组,并按照设计的要求使克隆的片段恰好插在紧邻报告基因的上游位置;随后再把重组混合
基因工程所用的克隆载体常称之为分子克隆载体(molecular cloning vector),它是一类可供外源DNA插入并携带重组DNA分子进入适当宿主细胞的DNA分子。如果打一个十分浅显的比喻,分子克隆载体犹如航天技术中的运载火箭,外源DNA分子就如火箭上搭载的卫星,宿主细胞则如外部深邃的空间。分子克隆载体的主要功能就是将外源基因携带入宿主细胞,并在宿主细胞中进行DNA扩增和使外源基因得以高效表达。在这一点上又与火箭不一样,因为火箭在运载卫星的过程中分级脱落和烧毁。 尽管克隆
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