- ￥680 - 1280
- KEMOBio
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- KM101209
- 2025年06月29日
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- 文献和实验
- 技术资料
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90天
- 英文名：
pT7-His-EGFP
- 库存：
100
- 供应商：
科淼生物
- 规格：
0.5ug/0.5ug
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥680.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 0.5ug | 产品价格： | ￥1280.0 |
英文名称：pT7-His-EGFP
货号：KM101209
图谱：微客服
宿主：大肠杆菌
用途：蛋白表达
片段类型：ORF
片段物种：
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光标记：绿色
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文献和实验-MEM、DMEM培养基和M-MLV逆转录酶；小牛血清；G418；DIG High PrimeDNA Labeling and Detection Starter Kit I1。 质粒 pGL3-promoter；含EBVR的质粒p220.2。 重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR的构建 采用StuI和XbaI消化p220.2，获得长4.7 kb的EBVR，包括EBV核抗原1(EBNA1)和OriP，克隆至pGL3-promotor的SV40启动子下游Hind Ill
1 、将转染后的细胞按照一定的比例接种到 6 孔板中（一般选用 1 ： 10 和 1 ： 100 两个梯度），分别采用 1200 m g/ml ， 1000 m g/ml 和 800 m g/ml 的 G418 进行筛选； 以转染携带 EGFP 质粒载体的细胞作为阳性对照，以未转染质粒载体的细胞作为阴性对照； 2 、每 3 ～ 4 天换液一次； 3 、筛选 20 ～ 30 天，即可得到稳定表达细胞株； 4 、传代后，以一定的 G418 浓度
，比如说，你用的是ＰＬＥＧＦ载体，抗性为Ｇ４１８，按不同的浓度检测如：200μg/ml、400μg/ml－－－－１２００ug/ml共６个梯度，细胞量最好的１０００Cell/ml，以１０－１４天最低浓度至全部细胞死亡为最佳浓度，我用的是ＰＴ６７最佳浓度为８００ug/ml4、转染，观察２４－４８h的转染情况，如达４０%以上，可加入Ｇ４１８筛选，３－５天换一次带药的培养液，一般在１５天即可，具体还看转入不同基因可以有差异，得到较高带ＥＧＦＰ的细胞。５、扩大培养，收集上清。６、收集到的上清可以做密度
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