杂交瘤测序服务

      卡梅德生物（KMD Bioscience）多年来致力于抗体领域研究。杂交瘤细胞单抗基因序列的获取是进行重组抗体制备，抗体药开发的基础。卡梅德生物拥有经验丰富的测序技术团队，良好的引物设计及抗体基因分析能力，能够为客户提供准确快速的单抗测序服务，确保目的抗体在进入下游应用之前能够被准确的重构。
       卡梅德生物承诺提供快速、完整、高可靠性的测序结果，并且能够准确熟练地对多物种来源的杂交瘤细胞进行序列测定，服务包括小鼠杂交瘤细胞，大鼠杂交瘤细胞，兔杂交瘤细胞以及不同物种的重组单克隆抗体（通过噬菌体技术构建的单抗基因获得）等。通过严格的质量控制，以确保高准确度。
        在制备重组抗体过程中，客户提供杂交瘤细胞经过PCR后，有时会出现两条重链和两条轻链的问题，导致后续轻重链配对组合出现多样性，使得重组抗体制备耗时，耗力。卡梅德生物通过设计一系列针对骨髓瘤细胞的IgG引物，同时结合细胞亚克隆技术，能够获得与目标抗体高度一致性的序列信息，从而解决这一难题。
        此外，卡梅德生物还能以成熟的密码子优化及基因合成策略为您将宝贵的抗体进行工程化表达与纯化。同时，我们拥有完善的高通量重组抗体表达平台和生物信息学平台，在测序完成之后可提供重组抗体的表达验证，通过数据库对比及序列可变区结构分析，保证交付序列的准确性，卡梅德生物还能提供重组抗体的De novo测序服务、N端测序及蛋白质理论覆盖率检测服务。依托于齐全的抗体平台建设，卡梅德生物可提供从抗原生产、抗体开发、杂交瘤细胞抗体基因测序到嵌合抗体生产、重组抗体表达、人源化抗体开发等一站式技术服务，以满足客户的不同需求。

服务类型：

--标准周期单克隆抗体测序服务：抗体可变区VH和VL测序、抗体VH，VL和前导区测序、全抗体VH，VL，前导区和恒定区测序，3-4周完成测序服务。
--快速单克隆抗体测序服务：从目标细胞株快速识别的抗体序列，可在10天内获得测序结果。

测序流程图：
 


服务内容：
 

步骤	服务内容	周期
1	* 杂交瘤细胞扩大培养，ELISA方法检测细胞上清抗体效价	1-2周
2	* Trizol裂解后提取总RNA	1-2天
3	* RT-PCR 反转录制备cDNA	1-2天
4	* PCR扩增抗体全长基因[VHCH123和VKCK/VLCL]基因，保证可变区FR1和FR4的序列保真性	1周
5	* 连接T载体测序，分析测序结果，保存正确克隆	3-5天

样品要求：
 

1	* 客户可直接提供抗原和杂交瘤细胞株（冻存细胞/活细胞/Trizol冻存细胞）
2	* 客户可提供抗原，杂交瘤细胞培养上清和杂交瘤细胞株的TriZol裂解液（通常5×106个细胞/2ml Trizol）
3	* 寄送要求：需提前与技术人员沟通

 
服务优势：
 
--IgG全基因克隆
--全程采用高保真聚合酶获得单克隆抗体基因的所有序列信息
--经验丰富的技术支持及测序实验人员，高标准的质量要求，保证测序准确度
--多物种杂交瘤测序：包括小鼠，大鼠，兔子等
--拥有高通量抗体验证平台，保证抗体质量
--完备严谨的生物信息学分析
--保证客户具有知识产权与信息安全，保密性高
--根据客户需求，制定个性化的单抗测序方案
--完整的上下游服务：可进行其它重组抗体相关服务，包括重组抗体表达，及抗体人源化等技术服务
公司介绍：
卡梅德生物科技（天津）有限公司作为国家高新技术企业，专注于为全球科学家和研究机构提供天然蛋白提取与发酵、重组蛋白定制表达服务，单、多克隆抗体开发，噬菌体文库构建与筛选服务；同时，基于我公司成熟的五大核心技术服务平台，成功研发了众多用于科学研究的重组蛋白、抗体、抗体药物靶点蛋白、工业酶、诊断原料等相关试剂。

核心平台：

---噬菌体抗体展示技术平台

卡梅德生物科技有限公司利用自有的噬菌体（M13，T7噬菌体）展示技术平台，能够为客户提供高性价比的重组VHH抗体（纳米抗体/驼类纳米抗体）制备方案，包括动物免疫，文库建立，文库筛选以及重组抗体的体外表达等。
 

---抗体工程技术平台

卡梅德生物科技的抗体工程平台包含单克隆抗体制备服务平台，多克隆抗体制备服务平台，抗体测序与改造平台。 单克隆抗体制备平台：基于杂交瘤技术的小鼠单抗技术平台，能够在2-3个月获得高亲和力与高特异性的单克隆抗体，同时基于噬菌体展示技术，我司能够制备多物种的重组单克隆抗体，包括小鼠，兔子，骆驼，羊驼以及人单抗。

多克隆抗体制备服务平台：能够为客户提供兔多抗，羊多抗，骆驼类多抗，牛多抗等多物种的抗体制备服务，根据不同的抗原类型，来自卡梅德生物的抗体专家会为您量身定做适合您需求的方案，以满足您的项目要求并节省您的宝贵时间。

抗体一级序列测序平台：为满足大量客户对抗体基因序列与氨基酸序列信息的需求，我们为客户提供De Novo抗体全长氨基酸序列解析和N端测序服务；同时我们设计积累多达80种杂交瘤抗体基因测序引物。

抗体改造技术平台：卡梅德生物技术的抗体改造平台包括嵌合抗体制备，抗体亲和力成熟以及抗体人源化服务。目前我们已经成功制备十几例嵌合抗体与人源化抗体，均成功交付。

 

---蛋白表达与纯化服务技术平台

卡梅德生物科技目前拥有四大蛋白表达平台，能为客户提供优质的蛋白表达技术服务。

哺乳动物表达平台： 目前公司拥有Freestyle CHO，Expi CHO，CHO-DG44，HEK293F，Vero等细胞系用于蛋白表达制备。公司秉承质量优先原则，全部统一采用Gibco细胞培养基和相关转染配套试剂，以保证每个批次的哺乳动物细胞蛋白表达产品高质量、高表达水平的交付。同时公司拥有的表达载体体系，相比市面常用蛋白表达载体，能够为客户提供更高纯度的蛋白。

昆虫细胞表达平台：目前公司常采用的昆虫表达细胞为SF9，配套使用的是来自Gibco的培养基，只为更快、更好地为客户提供高质量的产品。利用该蛋白表达平台，我们已经成功制备了多种人源跨膜蛋白，包括多种GPCR家族成员蛋白。

原核蛋白表达平台：大肠杆菌（E.coli）重组蛋白表达技术经过多年的发展，已经积累了很多的经验。但如果要在大肠杆菌表达体系获得不错的可溶以及高产量的蛋白表达，一个全方位设计的表达策略必不可少。卡梅德生物科技的专家团队在蛋白表达和抗体制备方面具有丰富的经验和知识储备，针对每位客户的需求，我们的都会提供具体的方案设计。

酵母蛋白表达平台：毕赤酵母，酿酒酵母等蛋白表达体系，适用于需要真核表达蛋白，同时兼具产量与性价比的项目需求特点。

植物表达平台：为了提供更好的服务，卡梅德生物携手国内重点科研单位共同为客户提供基因烟草瞬时转染技术的植物蛋白表达服务，项目从设计构建到蛋白表达只需要4-6周。该技术平台能够为客户在较短的时间内获得高纯度，高质量的植物来源的蛋白，已解决大部分植物蛋白在上述几大蛋白表达系统中不溶或不表达的难题。

---蛋白批量发酵平台

超高密度发酵技术：卡梅德生物科技能够为客户提供5L，10L,30L，80L体积的贴壁细胞高密度发酵技术服务（微载体贴壁培养技术），人源细胞贴壁细胞培养密度高达4x106个/ml，适用于病毒转染类型的蛋白高产量表达发酵，能够做到1g/L发酵水平。利用该技术平台，我们目前完成的重组抗体发酵表达记录高达4.7g/L发酵水平。

同时，借助有氧发酵技术，我们能够为客户提供原核和酵母的超高密度发酵服务，采用有氧发酵类型的原核发酵技术，蛋白产量比传统的原核发酵要高（相差接近100倍蛋白产量和得率）。

---蛋白纯化技术平台：

我司分别配制了Akta和BioRad Biological的蛋白纯化仪，同时拥有GE全套填料，包括Sphedax 75/200,500, G25,G100，CMFF,Q-FF，DEAE以及不同规格的预装柱等，能够在1-2周内为客户完成一套蛋白纯化的工艺开发小试方案。我司的科研团队成员均来自国内生物制药企业，硕士博士学历占比98%，因此有能力为客户提供快速，高质量天然蛋白和跨膜蛋白的纯化等优质服务。

 

---稳定细胞系筛选平台与基础分子生物平台

稳定细胞系构建平台：卡梅德生物可为客户定制不同类型的稳定细胞系构建与筛选服务，如利用Crisper/Cas9的多物种、多细胞系来源的细胞沉默，敲除，过表达等稳定细胞系；同时我们也为客户提供基于电转或脂质体转染（Lipofectin2000/3000）的稳定转染细胞系构建服务，如CHO细胞蛋白高表达细胞株等。

卡梅德生物的基础分子生物学平台承担了包括基因克隆，蛋白定量，免疫印迹检测（SDS-PAGE、WB），宿主核酸检测，蛋白抗体亲和纯化，ELISA操作，内毒素检测，HPLC分析，免疫组化，IP，免疫浊度，流式细胞术等服务。