TurboID邻近标记技术--蛋白互作

原理简介 　　TurboID是一种新的生物素连接酶，它可以将生物素转化为一种共价标记近端蛋白质的反应性中间体，进而将邻近的蛋白质标记上生物素。与BioID使用的生物素连接酶相比，TurboID的催化活性得到大大提升(标记时间从18 hrs缩短至10 min），从而大大的提高了标记效率。

　　TurboID邻近标记(Proximity labeling, PL)的原理是将TurboID生物素连接酶与诱饵蛋白融合，当诱饵蛋白与靶标蛋白发生互作时，TurboID生物素连接酶通过催化的共价修饰将邻近的蛋白标记上生物素，最后通过亲和素磁珠富集生物素标记的蛋白进行质谱鉴定，从而获得靶标蛋白信息。

　　蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interactions, PPIs)是细胞生命活动的基础。传统的体内蛋白质相互作用捕获技术如亲和纯化-质谱技术(AP-MS)，不能有效地捕获瞬时的或较弱的蛋白相互作用，也不适用于低丰度的蛋白或疏水性较强的膜蛋白，且无法分辨蛋白相互作用发生的细胞区室化信息，存在较多的限制。然而，许多重要的信号转导蛋白如受体激酶以及细胞谱系发生的驱动因子往往具有上述特征，这很大地限制了我们对于细胞活动精细调控过程的认识。
　　TurboID邻近标记技术就可以克服以上的一些难题，在研究低丰度蛋白的互作蛋白组以及稀有、瞬时细胞类型的细胞、亚细胞蛋白组方面相比传统AP-MS都有明显的优势。

　　传统AP-MS和酵母双杂交技术的弊端：
　　①酵母属于低等的真核生物，相比高等生物而言，其互作关系与真实的体内互作关系相差较大；
　　②不能有效地捕获瞬时的或较弱的蛋白相互作用；
　　③不适用于低丰度的蛋白或疏水性较强的膜蛋白；
　　④酵母体系依赖高质量的cDNA文库，而且假阳性较高；

技术优势

  ①可以捕获瞬时的或较弱的蛋白相互作用；

  ②适用于低丰度的蛋白或疏水性较强的膜蛋白的互作；
  ③在目标生物体内获得的互作情况可信度高，假阳性低；
  ④可以在佳的生理状态下获得的靶标蛋白的信息；
  ⑤即使瞬时互作的蛋白发生了转移，但由于靶标蛋白仍保留了生物素化的特征，也能通过TurboID邻近标记技术识别检测，不被细胞区室化所影响。

服务范畴

　　①研究蛋白与蛋白的相互作用；

　　②寻找目标激酶或者激酶的底物，用于瞬时互作或者弱互作蛋白的筛选；
　　③用于低丰度的蛋白或疏水性较强的膜蛋白的筛选；
　　④揭示目的蛋白在体内的互作景观；

服务周期

　　根据基因、细胞特性以及服务目的的不同，服务周期在4~6周。
服务流程 　　
合同签订>预付款支付>提供靶细胞或者植物（我司现有的不需要提供）>项目启动>实验开展（定期汇报进度）>实验结束>支付尾款，完成项目交付。

服务优势

　　①团队经验丰富；

　　②密切跟进实验进展，积极主动汇报进展；
　　③根据客户需求提供客户项目的相关数据以及分析的结果；
　　④提供实验详细记录，确保实验数据真实可靠。