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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
38
- 英文名:
Fasciola magna
- 保质期:
保存期限为12个月
- 供应商:
上海联祖
- 保存条件:
-20℃保存
- 规格:
50T
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| 大拟片形吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒 | 50T | LZ-P3554 |
原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
包装规格及成分:
使用方法:
一、样品 RNA 的制备
1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司 的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆转录)反应合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系)
2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI),
反应终体积为 20μL。
4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
公司正在出售的产品:
| GAS2L3: 生长停滞特异性蛋白2家族3抗体 0.2ml | Rhesus antibody Rh GCDFP15 特异性囊肿病液体蛋白15抗体 规格 0.2ml |
| Anti-Lck/p56-LCK 淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶抗体Multi-class antibodies规格: 0.2ml | Haase(hyaluronidase) 透明质酸酶/玻璃酸酶抗原 0.5mg |
| IL-4(Mouse Interleukin 4) ELISA Kit 小鼠白介素4Multi-class antibodies规格: 48T | ICAM1: 细胞间粘附分子-1抗体 0.1ml |
| HCT-116细胞,低分化结肠腺癌细胞 人子宫内膜腺癌细胞,HEC-1-A细胞 人肺成纤维细胞cDNAHPF cDNA | GOLPH4: 高尔基体膜蛋白抗体 0.2ml |
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| 天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗体 Anti-Eukaryotic aspartyl protease 0.1ml | USP3: 去泛素化酶3抗体 0.2ml |
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| Rhesus antibody Rh phospho-FAS (Tyr232) 0酸化载脂蛋白A1抗体 规格 0.1ml | 中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1 |
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文献和实验相关专题 实验室很多同学都要做Real time PCR实验,实验室的师兄师姐都会有很多宝贵意见,不过也有实验室前没有做过的,查找了下资料和大家分享下关于实时荧光 Taqman 探针设计、实时荧光PCR探针的选择、引物的设计及评价。 荧光探针法是用序列特异的荧光标记探针来检测产物,探针法的出现使得定量PCR技术的特异性比常规PCR技术大大提高。目前较常提及的有TaqMan探针、FRET杂交 探针(荧光共振能量传递探针)和分子
大家都知道进行绝对定量需要标准曲线,有些用户认为进行相对定量时就不需要标准曲线了,可以通过 2-ΔC'T来计算,但这一计算是有条件的,即所有荧光定量PCR扩增的效率都接近于100%,可以通过实验来证明。但大多数用户并没有进行这样的实验就直接用 2-ΔC'T 来计算了。这是错误的,会得到错误结论。无论是使用自配的试剂还是用商业的荧光定量试剂盒,最好买够试剂,以免进行预实验或正式实验时没有试剂而必需采用其他试剂,由于不同试剂的缓冲液成份有较大差别,如有的试剂中含有DMSO及Mg2+离子等,可能会
所特有的,下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率,把引物二聚体调整到越小越好;探针法则需要设计荧光探针,这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个:完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上;这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置,根据自己试验情况而定,本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
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