- ￥4600
- 南京万木春
- 进口/国产
- 23XR083
- 2025年11月17日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
/
- 库存：
现货库存
- 供应商：
南京万木春
- 肿瘤类型：
/
- 细胞类型：
原代细胞
- 品系：
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- 组织来源：
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- 相关疾病：
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- 物种来源：
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- 免疫类型：
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- 细胞形态：
/
- 是否是肿瘤细胞：
否
- 器官来源：
/
- 运输方式：
常温/干冰
- 年限：
/
- 生长状态：
/
- 规格：
5×10^5/T25方瓶
1 、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中静置 2-3 小时， 以稳定细胞状态，然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的完全培养液（备注： 先使用瓶子中完全培养液培养及尽快冻存保种细胞， 保存种子后再尝试自己完全培养液培养观察是否适合此细胞生长，以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡） ，最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。
2 、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液， 用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本完全脱落后加入完全培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 10ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 细胞培养箱中培养；
4）待细胞完全贴壁后， 观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3 、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本完全脱落后加入完全培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）用适当量的冻存液（完全培养液： FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期储存（或者按照梯度程序降温模式直接放置-80 度冻存后并转移液氮中长期储存）。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2）将冻存管中的细胞转移至含 5ml 完全培养液无菌离心管中，1000rpm 离心 5min ，然后加入 5ml 完全培养液混匀细胞， 将细胞悬液转移至 T25 培养瓶中， 放置于 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中培养；
3）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。
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文献和实验操作演示
正常 小鼠原代真皮纤维原细胞培养一、实验试剂1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S4、染色液： 0.4% Trypan Blue5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit6、检测试剂：抗小鼠Fibronectin
-->门静脉插管-->D-Hanks'液灌注，同时剪开下腔静脉-->灌以胰酶消化液-->离体肝脏并剪碎-->继续消化-->以尼龙网过滤-->450 g X 5'（4度，下同）-->ppt以HBSS重悬-->混以Nycodenz液-->转至离心管，并覆以HBSS-->1450 g X 16'-->取界面细胞-->重悬、离心收集细胞-->细胞计数，并判断存活率和产量-->按照常规接种-->次日换液。传代方法：弃培液-->以D-Hanks'液洗两次-->0.125％胰酶（原代最好加0.05% EDTA）消化
技术资料