本试剂盒仅供科研使用
3-磷酸甘油酸激酶(PGK)活性检测试剂盒说明书
（货号：WS5880W 微板法 96 样）
一、产品简介：
3-磷酸甘油酸激酶(PGK)是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化 3-
磷酸甘油酸和 ATP 反应产生 1,3-二磷酸甘油酸，后者在 3-磷酸甘油醛脱氢酶和 NADH 作
用下产生 3-磷酸甘油醛和 NAD+，通过测定 NADH 的下降量，进而得到 3-磷酸甘油酸激
酶(PGK)的活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 100mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
粉剂 mg×3 支
4℃保存
用前取一支甩几下或离心使试剂
落入底部，再加 0.4mL 蒸馏水溶解
备用。
试剂三
液体μL×1 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂四
液体 15mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
粉剂 mg×1 支
-20℃保存
用前甩几下或离心使试剂落入底
部，再加 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、天平、震荡仪、低温离心机、研钵。
四、3-磷酸甘油酸激酶（PGK）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取约 0.1g 组织样本，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆后于 4℃，12000rpm 离心 5min，
取上清液体待测。
【注】:若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或
细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔
10s，重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】:若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm，设定温度 25℃。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
样本
20
试剂一
10
试剂二
10
试剂三
10本试剂盒仅供科研使用
2
【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 20min 后读取 A2，改变后的反应时间需
代入计算公式重新计算。或适当加大样本量(如 40μL，则试剂四相应减少)，则改变后的
加样体积需代入计算公式重新计算。
2. 若下降趋势不稳定，可以每隔 20S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与
计算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
3. 若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会
偏高），可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
或向待测样本中加少许活性炭混匀静置 5min 后 12000rpm, 4℃离心 10min，上清液用于
检测；
4. 若ΔA 的值大于 0.5，则需减少反应时间（如减少至 5min），或减少样本量（如 10μL），
则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、按照样本质量计算：
酶活定义：每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
GPK(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(W×V1÷V)÷T=321.6×ΔA÷W
2、按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每毫克组织蛋白每分钟内氧化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GPK(nmol/min/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(V1×Cpr)÷T=321.6×ΔA÷Cpr
3、按细菌/细胞数量计算：
单位定义：每 104个细胞每分钟内氧化 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GPK(nmol/min/104 cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×109]÷(500×V1÷V)÷T=0.64×ΔA÷Cpr
ε---NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；
d---比色皿光径，0.5cm；
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入样本体积，0.02mL；
V2---反应体系总体积，0.2mL=2×10-4L；
T---反应时间，10min；
W---样本质量，g；
500---细胞数量，万；
Cpr---上清液蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
试剂四
140
混匀，室温（25℃）条件下，孵育 10min
试剂五
10
轻轻混匀，室温（25℃）条件下，30s 时于 340nm
处读取吸光值 A1，10min 后再读取 A2，
ΔA=A1-A2。
文献和实验
