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- wksubio
- WS8170F
- 国内
- 2025年12月16日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Acetesterase (AE) Activity Detection Kit
- CAS号：
WS8170F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
24T
本试剂盒仅供科研使用
乙酰酯酶（Acetylesterase，AE）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS8170F 分光法 24 样）
一、产品简介：
乙酰酯酶（EC 3.1.1.6，AE）已被证明是消除饲料细胞壁中阿魏酸等酚酸类木质素的关
键酶。可与其他细胞壁降解酶协同作用共同促进饲料等细胞壁的降解。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
粉剂×2 支
4℃保存
临用前每支加 0.7mL 无水乙醇混
匀溶解，仍 4℃保存。
试剂三
液体 5mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、可调式移液
器、研钵、蒸馏水。
四、乙酰酯酶（AE）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰
浴匀浆，4℃×12000rpm 离心 15min，取上清液待测。
【注】:若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或
细胞加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔
10s，重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：可直接测定，或者适当稀释后测定。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30 min，调节波长为 405nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂于 25℃水浴中预热 10 min。
③ 在 EP 管中依次加入下列试剂：
试剂名称（
μL）
测定管
对照管
样本
100
100
试剂一
460
500
试剂二
40
混匀，40℃孵育 30min。
试剂三
100
100
混匀，取全部上清液至 1mL 玻璃比色皿（光径
1cm）中（若有浑浊可 8000rpm 离心 5min 后取上
清），于 405nm 读取 A 值，ΔA=A 测定-A 对照（每
个样本做一个自身对照）。本试剂盒仅供科研使用
2
【注】：① 若ΔA 的值非常低在零附近，可增加样本量 V1（如增至 200μL，则试剂一相应减少）
或延长反应时间 T（如增至 60min 或更长），则重新调整的 V1 和 T 代入公式重新计算。
② 若△A 的值超过 1，则需要稀释样本，稀释倍数 D 代入计算公式；
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0259x - 0.0031，x 是 PNP 摩尔质量（
nmol）；y 是△A。
2、按照样本质量计算：
酶活定义：每克组织每分钟水解底物产生 1nmol PNP 定义为一个酶活单位。
AE (nmol/min/g 鲜重)=[(△A+0.0031)÷0.0259]÷(W×V1÷V)÷T×D=12.9×(△A+0.0031)÷W×D
3、按照样本蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每分钟水解底物产生 1nmol PNP 定义为一个酶活单位。
AE (nmol/min/mg prot)=[(△A+0.0031)÷0.0259]÷(Cpr×V1)÷T×D =12.9×(△A+0.0031)÷Cpr×D
4、按细菌/细胞数量计算：
酶活定义：每 104个细胞每分钟水解底物产生 1nmol PNP 定义为一个酶活单位。
AE (nmol/min/104 cell)=[(△A+0.0031)÷0.0259]÷(500×V1÷V)÷T×D
=0.03×(ΔA+0.0031)×D
5、按液体体积计算：
酶活定义：每毫升液体每分钟水解底物产生 1nmol PNP 定义为一个酶活单位。
AE(nmol/min/mL)=[(△A+0.0031)÷0.0259]÷V1÷T=12.9×(△A+0.0031)
W---样品质量，g；
V---提取液体积，1 mL；
V1---上清液体积（mL），0.1mL；
T---反应时间，30 min。
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
500---细胞数量，万；
Cpr---上清液蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1.4ml 蒸馏水超声溶解。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2 μmol/ml。也可根
据实际样本来调整标准品浓度。
3 依据对照管的加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。
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