本试剂盒仅供科研使用
琥珀酸脱氢酶（Succinate Dehydrogenase，SDH）试剂盒说明书
（货号：WS6580W
微板法 96 样）
一、产品简介：
琥珀酸脱氢酶（SDH，EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。
在真核生物中，结合于线粒体内膜，在原核生物中整合于细胞膜上，是连接呼吸电子传
递和氧化磷酸化的枢纽之一。
SDH 催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还
原 2,6-二*酚靛酚（DCPIP），并且在 600nm 处具有特征吸收峰，通过 600nm 吸光度值
的变化得出 SDH 酶活性大小。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体 120mL×1 瓶
-20℃保存
试剂二
液体 30mL×1 瓶
-20℃保存
试剂三
液体 0.5mL×1 支
-20℃保存
试剂四
粉体 mg×1 瓶
4℃保存
临用前甩几下使粉剂落入底
部，再加 20mL 蒸馏水溶解（观
察液体为蓝色），可分装保存。
试剂五
粉剂×4 支
-20℃避光保存
临用前甩几下使粉剂落入底
部，再加 0.4mL 蒸馏水溶解，
现配现用，两天内用完。
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、低温离心机、研钵。
四、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1.1 线粒体制备（提示：整个线粒体的提取过程须保持 4℃低温环境）：
1 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀浆，转
移至离心管后于 4℃×700g 离心 10min。
2
弃沉淀，上清液移至另一离心管中，4℃×12000g 离心 10min。上清液即胞浆提取物，
可用于测定从线粒体泄漏的 SDH（此步可选做），沉淀为线粒体。
3 在沉淀（线粒体）中加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或
200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），液体置于冰上用于线粒体中琥珀酸脱氢酶（SDH）
活性测定。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取，或按照细胞数
量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
1.2 原核生物（细菌）样本制备：
先收集细菌到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌加入 1mL 试剂二，超声波破
碎细菌（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm 4℃离心 10min，
取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 600nm。
② 所有试剂解冻至室温（25℃）。本试剂盒仅供科研使用
2
③ 在 96 孔板中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
试剂四
180
试剂五
10
样本
50
混匀，室温（25℃）下，10s 时立即于 600nm
处读取 A1，5min 后读取 A2，△A=A1-A2。
【注】若△A 差值较小，可以延长反应时间 T（如增至 15min 或更长），或加大样本量 V1（如增至 70μL），
则改变后的反应时间 T 和样本体积 V1 代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、线粒体制备样本的计算公式：
① 按样本蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟使 A600 变化 0.005 定义为一个酶活性单位。
SDH 活性（U/mg prot）＝ΔA÷0.005÷(V1×Cpr) ÷T=800×ΔA÷Cpr
② 按样本鲜重计算
酶活定义：每克组织每分钟使 A600 变化 0.005 定义为一个酶活性单位。
SDH 活性（U/g 鲜重）＝ΔA÷0.005÷(W× V1÷V)÷T=161.6×ΔA÷W
③ 按细胞数量计算
酶活定义：每 1 万个细胞每分钟使 A600 变化 0.005 定义为一个酶活性单位。
SDH 活性（U/104 cell）＝ΔA÷0.005÷(500×V1÷V)÷T=0.323×ΔA
2、原核生物（细菌）样本的计算公式：
① 按样本蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟使 A600 变化 0.005 定义为一个酶活性单位。
SDH 活性（U/mg prot）＝ΔA÷0.005÷(V1×Cpr) ÷T=800×ΔA÷Cpr
② 按细菌数量计算
酶活定义：每 1 万个细菌每分钟使 A600 变化 0.005 定义为一个酶活性单位。
SDH 活性（U/104 cell）＝ΔA÷0.005÷(500×V1÷V2)÷T=1.6×ΔA
V1---加入样本体积，0.05 mL；
V---加入提取液体积，0.202 mL；
V2---细菌的提取液体积，1mL；
T---反应时间，5 min；
W---样本质量，g；
500---细菌或细胞总数，500 万；
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
文献和实验
