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乙酰辅酶A含量试剂盒,微板法

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  • ￥2550 - 4900
  • wksubio
  • WS6280W
  • 国内
  • 2025年11月21日
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    上海瓦兰生物科技有限公司
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    • 英文名：

      Acetyl CoA Content Kit

    • CAS号：

      WS6280W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T/96T

    规格：48T产品价格：￥2550.0
    规格：96T产品价格：￥4900.0
    本试剂盒仅供科研使用
    乙酰辅酶 A（Acetyl-CoA）含量测定试剂盒说明书
    （货号：WS6280W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    乙酰辅酶 A 是能源物质代谢的重要中间代谢产物，在体内能源物质代谢中是一个枢
    纽性的物质。糖、脂肪、蛋白质三大营养物质通过乙酰辅酶 A 汇聚成一条共同的代谢
    通路--三羧酸循环和氧化磷酸化，经过这条通路彻底氧化生成二氧化碳和水，释放能
    量用以 ATP 的合成。它也是合成脂肪酸、酮体、胆固醇及其衍生物等生理活性物质的
    前体物质。
    苹果酸脱氢酶可催化苹果酸和 NAD+生成草酰乙酸和 NADH。柠檬酸合酶可催化乙
    酰辅酶 A 和草酰乙酸生成柠檬酸和辅酶 A。利用苹果酸脱氢酶和柠檬酸合酶的偶联反
    应，乙酰辅酶 A 含量和 NADH 的生成量成正比，340nm 下吸光值的上升量反应了乙
    酰辅酶 A 含量的高低。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 20mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉体 mg×1 瓶
    -20℃保存 部，再加 用前甩几下或离心使试剂落入底
    9mL 试剂一溶解备用。
    试剂三
    粉体 mg×1 瓶
    4℃保存
    用前甩几下或离心使试剂落入底
    部，再加 9mL 试剂一溶解备用。
    试剂四
    粉体 mg×1 支
    -20℃保存 用前甩几下使试剂落入底部
    ，再加
    1.1mL 蒸馏水溶解备用。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
    四、乙酰辅酶 A 含量测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织样本，加 1mL 的提取液，进行冰浴匀浆，粗提液全部转移到 EP 管
    中，12000rpm，4℃离心 10min，上清液待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
    ② 细菌/细胞样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
    提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
    12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量(104)：提取液(mL)为 500~1000：1 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30min，设定波长至 340nm。
    ② 试剂解冻至室温（25℃），在 96 孔板中依次加入：本试剂盒仅供科研使用
    2
    【注】若ΔA 差值较小如小于 0.005，可增加样本取样质量 W，如增至 0.2g 或更多，或增
    加样本加样量 V1（如增至 60μL 或更多，则试剂二和三分别减少 20μL 相应减少），
    则改变后的 V1 和 W 需代入公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按照样本质量计算：
    乙酰辅酶 A 含量(nmol/g 鲜重)=[ΔA÷ε÷d×V2×109]÷(W×V1÷V)=3215×ΔA÷W
    2、按细胞数量计算：
    乙酰辅酶 A 含量(nmol/104 cell)=[ΔA÷ε÷d×V2×109]÷(500×V1÷V)=6.43×ΔA
    ε---NADH 摩尔消光系数，6220 L/mol/cm；
    d---96 孔板光径，0.5cm；
    V---提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，20μL=0.02mL；
    V2---反应体系总体积，200μL=2×10-4L；
    W---样品质量，g；
    500---细胞数量，万。
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    20
    试剂二
    85
    试剂三
    85
    混匀，室温（25℃）下，5min 后于 340nm
    处读取 A1 值。
    试剂四
    10
    混匀，室温（25℃）下，反应 10min 后
    于 340nm 处读取吸光值 A2，
    ΔA=A2-A1。

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