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ATP含量试剂盒,微板法

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  • ￥690 - 940
  • wksubio
  • WS5180W
  • 国内
  • 2025年07月19日
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    • 英文名：

      ATP Content Kit

    • CAS号：

      WS5180W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T/96T

    规格：48T产品价格：￥690.0
    规格：96T产品价格：￥940.0
    本试剂盒仅供科研使用
    ATP 含量（磷钼酸比色法）测定试剂盒说明书
    （货号：WS5180W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    三磷酸腺苷（ATP）是生物体内能量转换最基本的载体,是生物体内最直接的能量来源，
    测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。
    肌酸激酶催化三磷酸腺苷（ATP）和肌酸生成磷酸肌酸，用磷钼酸比色法进行检测，
    经波长扫描产物在 700nm 处有最大吸收峰，进而计算得到 ATP 的含量。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    提取液A 50mL×1瓶
    提取液B 10mL×1瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×2 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使粉体落入底部，每支再加入
    1.1mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装
    后-20℃保存，禁止反复冻融。
    试剂二
    液体 10mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂三
    粉剂μg×2 支
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使粉体落入底部，每支再加入
    0.55mL 蒸馏水溶解待用；用不完的试剂分装后
    -20℃保存，禁止反复冻融。
    试剂四
    粉剂 mg×2 瓶
    4℃保存
    临用甩几下使粉剂落入底部，每瓶再依次加入
    2.86mL 水混匀，最后加 1.14mL 浓硫酸（加浓
    硫酸时务必小心，逐滴缓慢加入水中，注意防护）。
    试剂五
    液体 40mL×1 瓶
    4℃保存
    标准液
    粉体 mg×1 支
    -20℃保存
    用前准确称取 2mg 粉体即 ATP 至一新 EP 管中，
    再加 1.7mL
    蒸馏水溶解即
    2μ
    mo
    L/mL
    ，
    再用水稀
    释一倍成
    1μ
    moL/mL 标准品
    ，
    待用
    (-20
    ℃
    保存，一
    周内用完)。
    【注】：全程操作需无磷环境；试剂配置最好用新的枪头和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿，
    避免磷污染。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、研钵和蒸馏水。
    四、ATP 含量检测：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织加入研钵中，加 0.5mL 提取液 A 进行匀浆，转至 EP 管中，于
    12000rpm，室温离心 10min，取出 250μL 上清液至一新 EP 管中，再加入适量提取液 B
    调 PH 至中性（用 PH 试纸测量，PH 在 6.5-8 之间均可）。再加蒸馏水定容至 0.5mL，
    该液体待测备用。
    【注】：也可以按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
    ② 细菌/真菌样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心弃上清；取500万细菌或细胞至研钵中，加0.5mL
    提取液 A 进行匀浆，低温超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔本试剂盒仅供科研使用
    2
    10s，重复 30 次），于 12000rpm，室温离心 10min，取出 250μL 上清液至一新 EP 管中，
    再加入适量提取液 B 调 PH 至中性（用 PH 试纸测量，PH 在 6.5-8 之间均可）。再加蒸
    馏水定容至 0.5mL，该液体待测备用。
    ③ 液体样本：
    澄清样本直接检测，若浑浊则 12000rpm，4℃离心 5min 后取上清液测定。
    【注】：也可以按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例提取。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 700nm。
    ② 反应液配制：按照试剂四：试剂五=1：5 的比例混匀。用多少配多少的混合液。
    ③ 在 EP 管中依次加入：
    试剂名称(μL) 测定管
    对照管
    标准管
    （仅做一次）
    空白管
    （仅做一次）
    样本
    20
    20
    标准液
    20
    试剂一
    20
    20
    试剂二
    50
    50
    50
    50
    试剂三
    10
    10
    蒸馏水
    30
    50
    充分混匀，37℃准确水浴 30min
    反应液
    180
    180
    180
    180
    混匀，37℃水浴 20min，液体全部转移至 96 孔板中，在 700nm 下
    读取各管吸光值 A（每个测定管需设一个对照管）。
    【注】若 A 测定-A 对照的值小于 0.01，可增加取样质量 W（如增至 0.2g）或增加样本加
    样量 V1（如由 20μL 增至 50μL，则试剂二相应减少）；标准管仍为 20μL，其他试剂不变；
    则改变后的 W 和 V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本鲜重计算：
    ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[C 标准×V 标×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)]÷(W×V1÷V)
    =(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)÷W
    2、按细菌/细胞密度计算：
    ATP 含量(nmol/104 cell)=[C 标准×V 标×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)]÷(500×V1÷V)×103
    =2×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)
    3、液体中 ATP 含量计算：
    ATP 含量(μmol/mL)=[C 标准×V 标×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)]÷V1
    =(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)
    C 标准---标准液浓度，1μmol/mL；
    V---加入提取液体积，1mL；
    V1---加入反应体系中样本体积，0.02mL；
    V 标---标准品加样体积，0.02mL；
    W---样本质量，g；
    500---细胞或细菌总数，万。

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