ATP含量试剂盒,微板法

ATP含量试剂盒,微板法

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  • ¥690 - 940
  • wksubio
  • WS5180W
  • 国内
  • 2025年07月19日
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    • 英文名

      ATP Content Kit

    • CAS号

      WS5180W

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T/96T

    规格:48T产品价格:¥690.0
    规格:96T产品价格:¥940.0
    本试剂盒仅供科研使用
    ATP 含量(磷钼酸比色法)测定试剂盒说明书
    (货号:WS5180W 微板法 96 样)
    一、产品简介:
    三磷酸腺苷(ATP)是生物体内能量转换最基本的载体,是生物体内最直接的能量来源,
    测定 ATP 含量并且计算能荷,能够反映能量代谢状态。
    肌酸激酶催化三磷酸腺苷(ATP)和肌酸生成磷酸肌酸,用磷钼酸比色法进行检测,
    经波长扫描产物在 700nm 处有最大吸收峰,进而计算得到 ATP 的含量。
    二、试剂盒的组成和配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    提取液A 50mL×1
    提取液B 10mL×1
    4℃保存
    试剂一
    粉剂 mg×2
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使粉体落入底部,每支再加入
    1.1mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂分装
    -20℃保存,禁止反复冻融。
    试剂二
    液体 10mL×1
    4℃保存
    试剂三
    粉剂μg×2
    -20℃保存
    用前甩几下或离心使粉体落入底部,每支再加入
    0.55mL 蒸馏水溶解待用;用不完的试剂分装后
    -20℃保存,禁止反复冻融。
    试剂四
    粉剂 mg×2
    4℃保存
    临用甩几下使粉剂落入底部,每瓶再依次加入
    2.86mL 水混匀,最后加 1.14mL 浓硫酸(加浓
    硫酸时务必小心,逐滴缓慢加入水中,注意防护)。
    试剂五
    液体 40mL×1
    4℃保存
    标准液
    粉体 mg×1
    -20℃保存
    用前准确称取 2mg 粉体即 ATP 至一新 EP 管中,
    再加 1.7mL
    蒸馏水溶解即
    mo
    L/mL
    再用水稀
    释一倍成
    moL/mL 标准品
    待用
    (-20
    保存,一
    周内用完)
    【注】:全程操作需无磷环境;试剂配置最好用新的枪头和玻璃移液器等,也可以用一次性塑料器皿,
    避免磷污染。
    三、所需的仪器和用品:
    酶标仪、96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、研钵和蒸馏水。
    四、ATP 含量检测:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本制备:
    ① 组织样本:
    称取约 0.1g 组织加入研钵中,加 0.5mL 提取液 A 进行匀浆,转至 EP 管中,于
    12000rpm,室温离心 10min,取出 250μL 上清液至一新 EP 管中,再加入适量提取液 B
    PH 至中性(用 PH 试纸测量,PH 6.5-8 之间均可)。再加蒸馏水定容至 0.5mL
    该液体待测备用。
    【注】:也可以按照组织质量(
    g):提取液体积(mL)15~10 的比例提取。
    ② 细菌/真菌样本:
    先收集细菌或细胞到离心管内,离心弃上清;取500万细菌或细胞至研钵中,加0.5mL
    提取液 A 进行匀浆,低温超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔本试剂盒仅供科研使用
    2
    10s,重复 30 次),于 12000rpm,室温离心 10min,取出 250μL 上清液至一新 EP 管中,
    再加入适量提取液 B PH 至中性(用 PH 试纸测量,PH 6.5-8 之间均可)。再加蒸
    馏水定容至 0.5mL,该液体待测备用。
    ③ 液体样本:
    澄清样本直接检测,若浑浊则 12000rpm4℃离心 5min 后取上清液测定。
    【注】:也可以按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)15~10 的比例提取。
    2、上机检测
    ① 酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 700nm
    反应液配制:按照试剂四:试剂五=15 的比例混匀。用多少配多少的混合液。
    ③ 在 EP 管中依次加入:
    试剂名称(μL) 测定管
    对照管
    标准管
    (仅做一次)
    空白管
    (仅做一次)
    样本
    20
    20
    标准液
    20
    试剂一
    20
    20
    试剂二
    50
    50
    50
    50
    试剂三
    10
    10
    蒸馏水
    30
    50
    充分混匀,37℃准确水浴 30min
    反应液
    180
    180
    180
    180
    混匀,37℃水浴 20min,液体全部转移至 96 孔板中,在 700nm
    读取各管吸光值 A(每个测定管需设一个对照管)。
    【注】若 A 测定-A 对照的值小于 0.01,可增加取样质量 W(如增至 0.2g)或增加样本加
    样量 V1(如由 20μL 增至 50μL,则试剂二相应减少);标准管仍为 20μL,其他试剂不变;
    则改变后的 W V1 需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算:
    1、按样本鲜重计算:
    ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[C 标准×V ×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)]÷(W×V1÷V)
    =(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)÷W
    2、按细菌/细胞密度计算:
    ATP 含量(nmol/104 cell)=[C 标准×V ×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)]÷(500×V1÷V)×103
    =2×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)
    3、液体中 ATP 含量计算:
    ATP 含量(μmol/mL)=[C 标准×V ×(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)]÷V1
    =(A 测定-A 对照)÷(A 标准-A 空白)
    C 标准---标准液浓度,1μmol/mL
    V---加入提取液体积,1mL
    V1---加入反应体系中样本体积,0.02mL
    V ---标准品加样体积,0.02mL
    W---样本质量,g
    500---细胞或细菌总数,万。

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