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ATP含量试剂盒(酶法),微板法

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  • ￥970
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  • WS7580W
  • 国内
  • 2026年01月09日
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    • 英文名：

      ATP Content Kit (Enzymatic Method)

    • CAS号：

      WS7580W

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      96T

    本试剂盒仅供科研使用
    ATP 含量测定试剂盒说明书
    （货号：WS7580W 微板法 96 样）
    一、产品简介：
    三磷酸腺苷（ATP）是生物体内能量转换最基本的载体,是生物体内最直接的能量来源，
    测定 ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。
    三磷酸腺苷（ATP）在己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶混合酶的作用下，使 ATP 水解
    并伴随着 NADPH 的生成，通过检测 340nm 下 NADPH 的增加量，进而计算得到 ATP 的
    含量。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    100mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    粉剂×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下或离心，使粉剂落
    入底部，再加 1.1mL 蒸馏水备用。
    试剂二
    粉剂×1 支
    -20℃保存
    临用前甩几下或离心，使粉剂落
    入底部，再加 1.1mL 蒸馏水备用。
    试剂三
    16mL 液体×1 瓶
    4℃保存
    试剂四
    粉剂×1 支
    4℃保存
    临用前甩几下或离心，使粉剂落
    入底部，再加 1.1mL 蒸馏水备用。
    三、所需的仪器和用品：
    酶标仪、96 孔板、恒温培养箱、可调式移液枪、研钵和蒸馏水。
    四、ATP 含量检测：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织加入研钵中，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆，12000rpm，4℃离心
    10min，取上清液，置冰上待测。
    【注】：也可以按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例提取。
    ② 细菌/真菌样本：
    先收集细菌或细胞到离心管内，离心弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
    冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30
    次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清液，置冰上待测。
    【注】：也可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。
    ③ 液体样本：澄清的液体直接检测；若浑浊则离心后取上清检测。
    ④ 高蛋白含量样本：
    ④-1：称取约 0.1g 组织加入研钵中，加入 1mL 蒸馏水，进行匀浆，转至 EP 管中，于
    95℃水浴中煮 5min，取出冷却至室温后于 12000rpm，室温离心 10min，上清液待测。
    ④-2：或称取约 0.1g 组织加入研钵中，加入 0.5mL 高氯酸（0.5M），进行冰浴匀浆，
    8000rpm，4℃离心 10min，取全部上清至另一 EP 管中，再加入与上步所取上清液等体
    积的 KOH 或 NaOH（0.5M）混匀，使整个液体 PH 近中性，若澄清直接检测，若浑浊
    则 8000rpm，4℃离心 5min 后取上清液测定，此时整个上清液体积记为 V3。
    2、上机检测：
    ① 酶标仪预热 30 min 以上，调节波长到 340nm。本试剂盒仅供科研使用
    2
    ② 在 96 孔板中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    10
    试剂一
    10
    试剂二
    10
    试剂三
    160
    混匀，室温（25℃）下，5min后于340nm
    处读取A1值。
    试剂四
    10
    混匀，室温（25℃）下，反应15min
    于340nm处读取A2值，ΔA=A2-A1。
    【注】若ΔA 差值在零附近，可增加样本量 V1（如 40μL，则试剂三相应减少）。
    则改变后的 V1 需代入公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本鲜重计算：
    ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(W×V1÷V)=6.35×ΔA÷W
    2、按细菌/细胞密度计算：
    ATP 含量(μmol/104 cell)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(500×V1÷V)=0.013×ΔA
    3、液体中 ATP 含量计算：
    ATP 含量(μmol/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷V1=6.35×ΔA
    4、高蛋白样本中 ATP 含量计算：
    ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(W×V1÷V)=6.35×ΔA÷W
    ATP 含量(μmol/g 鲜重)=[ΔA÷(ε×d)×V2×106]÷(W×V1÷V3)=6.35×ΔA÷V3÷W
    ε---NADPH的摩尔吸光系数为6.3×103L/mol/cm； d---光径距离，0.5cm；
    V---提取液体积，1mL；
    V1---样本体积，10μL=0.01mL；
    V2---反应总体积，200μL=2×10-4L；
    ATP分子量---551.14；
    V3---高蛋白组织样本最终上清液总体积，mL；
    W---样本质量，g;
    检测线范围---0.06μmol/mL-4μmol/mL。

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