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- WS2170F
- 国内
- 2025年12月19日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
β- Xylosidase Reagent Kit
- CAS号：
WS2170F
- 保质期：
3个月
- 供应商：
上海瓦兰生物
- 保存条件：
4℃
- 规格：
24T
本试剂盒仅供科研使用
β-木糖苷酶（β- xylosidase）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS2170F 分光法 24 样）
一、产品简介 ：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)是一类重要的木聚糖降解水解酶，存在于植物、细菌和真菌等
生物体，主要从非还原末端把木二糖和低聚木糖催化切割为木糖单体，产物木糖可作为
碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比
传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
β-木糖苷酶催化对硝基*酚-β-D-木糖苷产生对硝基*酚（PNP），该产物在 405nm 处
有特征吸收峰，通过测定 405nm 光吸收增加速率，即可计算β-木糖苷酶活性。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 30mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部，
再加 2mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
液体 6mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液 27mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、低温离心机、天平、
研钵、冰和蒸馏水。
四、β-木糖苷酶活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本的制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰
浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1:5~10 比例提取。
② 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声
3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】若增加样本量，可按照细菌或细胞数量(104 个)：提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min，调节波长至 405nm，蒸馏水调零。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
60
60
试剂一
75
蒸馏水
75
试剂二
105
105
迅速混匀，45℃保温 20min
试剂三
540
540
混匀， 取全部澄清液体转移至 1mL 玻璃比色皿中，于
405nm 处测定吸光值 A，ΔA=A 测定-A 对照（每个测定本试剂盒仅供科研使用
2
管需设一个对照管）。
【注】：若ΔA 低于 0.01，可增加样本取样量 V1（如增至 120μL，则试剂三相应减
少），或延长保温时间（如：40min 或更长），或增加样本质量 W，则改变后
的 V1 和 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y=0.0211x-0.0004；x 为标准品摩尔质量（nmol），y 为ΔA。
2、按蛋白浓度计算：
定义：45℃下，每毫克蛋白每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚（PNP）为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1×Cpr)÷T
=39.5×(ΔA+0.0004)÷ Cpr
3、按样本质量计算：
定义：45℃下，每克组织每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚（PNP）为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1÷V×W)÷T
=39.5×(ΔA+0.0004)÷W
4、按细胞数量计算：
定义：45℃下，每 104个细胞每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚（PNP）为一酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1÷V×细胞数量)÷T
=39.5×(ΔA+0.0004)÷细胞数量
5、按液体体积计算：
定义：45℃下，每毫升液体每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚（PNP）为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷V1÷T
=39.5×(ΔA+0.0004)
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入反应体系中样本体积，60μL=0.06mL；
W---样本质量，g；
500---细胞或细菌总数，500 万；
T---反应时间，20min；
PNP 对分子质量---139.11。
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25 mg/mL。也可根据
实际样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管加入：60μL 标准品+75μL 蒸馏水+105μL 试剂二+540μL 试剂三，混匀，取
全部澄清液体转移至 1mL 玻璃比色皿中，于 405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。
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文献和实验相关实验
形式的 N-聚糖。植物复杂形式 N-糖苷有一个挂在中心的近端氨基葡糖上的 α-1-3 岩藻糖；一个与中心少甘露糖连接的 β-1-2 木糖残基，和/或与它们的末端天线（称为 Lewisa ) 连接的 Gal/β-3 (Fucα-1-4 ) GlcNAc 寡聚糖末端序列，称为 Lewisa ( 图 25-1B ) [1] 。 1. 2 O-糖基化 在植物细胞中 O-糖基化可分为两种类型。即分泌蛋白糖基化或细胞质/核蛋白糖基化。蛋白质上不同位点的 O-连聚糖的性质不同
3 ) 。 ( 2 ) β-巯基乙醇（见注4) 。 ( 3 ) 氯仿：异戊醇（24 : 1 ) ( 见注4) 。 ( 4 ) 10 mol/L LiCl。 ( 5 ) SSTE 缓冲液：1.0 mol/L NaCl，0.5% SDS, 10 mmol/L Tris-HCl ( pH 8.0 ) ，1 mmol/L EDTA。 2.4.2 小麦胚乳总 RNA 提取（[12 ]) ( 1 ) 匀浆缓冲液（见注 5)：1.4% ( m/V ) SDS，0.1 mmol/L pH 8.0 乙酸
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