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还原型抗坏血酸（AsA）含量测定试剂盒

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  • ￥520
  • wksubio
  • WS1020F
  • 国内
  • 2025年07月20日
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    • 英文名：

      Reduced Ascorbic Acid (AsA) Content Determination Kit

    • CAS号：

      WS1020F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    还原型抗坏血酸（AsA）含量测定试剂盒说明书
    （货号：WS1020F 分光法 48 样）
    一、产品简介：
    抗坏血酸 AsA 又称维生素 C。是一种重要的抗氧化剂，在氧化还原代谢反应中起调节
    作用，抗坏血酸（AsA）与脱氢抗坏血酸（DHA）的比值（AsA/ DHA）是反映细胞氧化
    状态的另一个重要指标。
    还原型抗坏血酸（AsA）把三价铁离子还原成二价铁离子，二价铁离子与红菲咯啉反
    应生成红色络和物，在 534nm 处有特征吸收峰，颜色深浅与还原型抗坏血酸含量成正比。
    二、试剂盒的组成和配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 15mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    A：液体×1 支
    试剂瓶 B(空瓶)
    4℃保存
    试 剂 二 B 液 配 制 ： 临 用 前 取
    0.024mLA 液至试剂瓶 B 中，再加
    4.976mL 无水乙醇，混匀备用。
    试剂三
    粉体 mg×1 瓶
    4℃保存
    用前甩几下使粉体落入底部，再
    加 10mL 无水乙醇混匀溶解（该
    试剂难溶，可超声溶解）。
    试剂四
    液体 5mL×1 瓶
    4℃保存
    溶液为淡黄色。
    标准品
    粉剂×2 支
    4℃保存
    临用前：每支用前甩几下标准品
    管，使粉剂落入底部，再加入
    1mL 试 剂 一 混 匀 溶 解 ， 即 得
    1mg/mL，再用试剂一稀释 100
    倍为 0.01mg/mL 溶液即为标准
    液（现配现用）。
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、研钵、冰、低温离心机、无水乙醇、
    可调式移液器和蒸馏水。
    四、还原型抗坏血酸（AsA）含量测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    称取约 0.1g 组织(水分充足的果实样本取约 0.5g 组织或更多)，加入 1mL 预先预冷的提
    取液，进行冰浴匀浆，室温静提 10min 后，12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上
    待测。
    【注】：若增加样本，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
    ② 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 534nm，蒸馏水调零。本试剂盒仅供科研使用
    2
    ② 叶片类样本直接检测即可，果肉类样本一般需先稀释 10 倍再检测（可按照加样表操作
    时加入 30μL 样本，试剂一增加为 420μL）。
    ③依次在 EP 管中依次加入：
    试剂名称（
    μL） 测定管
    标准管
    （仅做一次）
    空白管
    （仅做一次）
    样本
    300
    标准液
    300
    提取液
    300
    试剂一
    150
    150
    150
    无水乙醇
    150
    150
    150
    试剂二 B 液
    75
    75
    75
    试剂三
    150
    150
    150
    试剂四
    75
    75
    75
    混匀，于 30℃反应 60min 后，立即取全部澄清液体（若有
    沉淀需 8000rpm，室温离心 5min，取上清液）至 1mL 玻璃
    比色皿中，立即于 534nm 处读取各管吸光值 A。
    【注】1.若提取完的样本上清液有较强的背景色（如粉色，红色等），需增设一个样本自身对照：
    即对照管为 300μL 样本+150μL 试剂一+75μL 试剂二 B 液+375μL 无水乙醇，30℃反应 60min
    后，剩余步骤同测定管，△A=A 测定-A 对照-A 空白。
    2.若测定管大于 1.8，可对样本进行稀释 D，或降低样本量 V1 则试剂一相应增加。则稀释倍
    数 D 或改变后的样本体积 V1 需代入公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按样本质量计算
    AsA(mg/g 鲜重) =[(A 测定-A 空白) ÷(A 标准-A 空白)] ×（C 标准×V 标准）÷(W×V1÷V) ×D
    =0.01×(A 测定-A 空白) ÷(A 标准-A 空白)÷W×D
    3、按液体体积计算
    AsA (mg/mL) =[(A 测定-A 空白) ÷(A 标准-A 空白)] ×（C 标准×V 标准）÷V1×D
    =0.01×(A 测定-A 空白) ÷(A 标准-A 空白) ×D
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入反应体系中上清液体积，0.3mL；
    V 标准---加入标准液体积，0.3mL；
    C 标准---标准液浓度，0.01mg/mL；
    W---样品质量（
    g）；
    D---稀释倍数，若没有稀释即为 1。

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