本试剂盒仅供科研使用
β-木糖苷酶（β- xylosidase）活性测定试剂盒说明书
（货号：WS2170W 微板法 48 样）
一、产品简介 ：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)是一类重要的木聚糖降解水解酶，存在于植物、细菌和真菌等
生物体，主要从非还原末端把木二糖和低聚木糖催化切割为木糖单体，产物木糖可作为
碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比
传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
β-木糖苷酶催化对硝基*酚-β-D-木糖苷产生对硝基*酚（PNP），该产物在 405nm 处
有特征吸收峰，通过测定 405nm 光吸收增加速率，即可计算β-木糖苷酶活性。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
粉剂 mg×1 支
4℃保存 用前甩几下使试剂落入底部，
再加 1.4mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二
液体 5 mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液 20 mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉剂×1 支
4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂
三、所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、可调式移液器、低温离心机、天平、研钵、冰和蒸馏水。
四、β-木糖苷酶活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本的制备：
① 组织样本：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，进行冰
浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 比例提取。
② 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细
胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声
3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】若增加样本量，可按照细菌或细胞数量(104 个)：提取液体积(mL)为 500~1000：1 的比例提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，调节波长至 405nm。
② 在 EP 管中依次加入：
试剂名称（μL）
测定管
对照管
样本
20
20
试剂一
25
蒸馏水
25
试剂二
35
35
迅速混匀，45℃保温 20min
试剂三
180
180本试剂盒仅供科研使用
2
混匀， 取 200μL 转移到 96 孔板中，405nm 处测定吸光
值 A，
ΔA=A 测定-A 对照（每个测定管需设一个对照管）。
【注】：若ΔA 低于 0.01，可增加样本取样量 V1（如增至 40μL，则试剂三相应减少），
或延长保温时间（如：40min 或更长），或增加样本质量 W，则改变后的 V1
和 T 和 W 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y=0.0447x-0.0123；x 为标准品摩尔质量（nmol），y 为ΔA。
2、按蛋白浓度计算：
定义：45℃下，每毫克蛋白每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚（PNP）为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0123)÷0.0447÷(V1×Cpr)÷T
=56×(ΔA+0.0123)÷ Cpr
3、按样本质量计算：
定义：45℃下，每克组织每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚（PNP）为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA+0.0123)÷0.0447÷(V1÷V×W)÷T
=56×(ΔA+0.0123)÷W
4、按细胞数量计算：
定义：45℃下，每 104个细胞每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚（PNP）为一酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA+0.0123)÷0.0447÷(V1÷V×细胞数量)÷T
=56×(ΔA+0.0123)÷细胞数量
5、按液体体积计算：
定义：45℃下，每毫升液体每分钟催化产生 1 nmol 对硝基*酚（PNP）为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0123)÷0.0447÷V1÷T
=56×(ΔA+0.0123)
V---加入提取液体积，1mL；
V1---加入反应体系中样本体积，20μL=0.02mL；
W---样本质量，g；
500---细胞或细菌总数，500 万；
T---反应时间，20min；
PNP 对分子质量---139.11。
Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（1mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1ml 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25 mg/mL。也可根据
实际样本来调整标准品浓度。
3 在 EP 管加入：20μL 标准品+25μL 蒸馏水+35μL 试剂二+180μL 试剂三，混匀，取
200μL 至 96 孔板中，于 405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。
文献和实验
