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葡萄糖氧化酶（GOD）活性测定试剂盒

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  • ￥490
  • wksubio
  • WS1950F
  • 国内
  • 2025年11月23日
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    • 英文名：

      Glucose oxidase (GOD) activity assay kit

    • CAS号：

      WS1950F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    葡萄糖氧化酶（GOD）活性测定试剂盒说明书
    （货号：WS1950F 分光法 48 样）
    一、产品简介：
    葡萄糖氧化酶（GOD，EC 1.1.3.4）是一种常见于多种微生物中的氧化还原酶，葡萄糖
    氧化酶催化葡萄糖和氧反应生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和特异显色剂反应产生
    （粉）红色产物，该产物在510nm有最大吸收峰，进而得到葡萄糖氧化酶酶活性大小。
    二、试剂盒组分与配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 15mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    液体 15mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂三
    粉体 mg×2 支
    4℃保存
    用前甩几下使粉体落入底部，每支
    加 1.2mL 的蒸馏水溶解备用。
    标准管
    液体 mL×1 支
    4℃保存
    三、所需仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、天平、移液器、研钵、离心机。
    四、葡萄糖氧化酶（GOD）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    0.1g 组织样本（水分充足的样本建议取 0.2g 左右），加 1mL 的蒸馏水研磨，粗提液
    全部转移到 EP 管中，12000rpm，4℃离心 10min，上清液待测。
    ② 细胞/细菌样本：
    先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细胞/细菌加入 1mL 蒸馏水或 PBS
    或生理盐水，超声波破碎细胞/细菌（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30
    次）；12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
    2、上机检测：
    1 可见分光光度计预热 30min，设定波长到 510nm，蒸馏水调零。
    2 所有室温至室温（25℃）。在 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    试剂一
    300
    试剂二
    300
    样本
    60
    混匀，37℃孵育 5min
    试剂三
    40
    混匀，于 510nm 下读取吸光值 A1，37℃孵育
    20min 后读取吸光值 A2，△A =A2-A1。
    【注】：若△A 值在零附近，则增加样本加样体积 V1（如增至 50μL，则试剂一相应减少），
    或延长反应时间 T（如延长至 40min 或 60min），则改变后的 V1 和 T 需代入公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
    2
    五、结果计算：
    1、标准曲线：y = 4.8162x - 0.0364：x 为 H2O2标准品(μmoL)，y 为ΔA。
    2、按样本鲜重计算：
    单位定义：在 37℃，每克组织每小时生成 1μmoLH2O2 定义为一个酶活单位（U）。
    GOD (μmoL/h/g 鲜重)=[(ΔA+0.0364)÷4.8162]÷(W×V1÷V)÷T =10.4×(ΔA+0.0364)÷W
    3、按样本蛋白浓度计算：
    单位定义：在 37℃，每毫克组织蛋白每小时生成 1μmoLH2O2 定义为一个酶活单位（U）。
    GOD (μmoL/h/mg prot)=[(ΔA+0.0364)÷4.8162]÷(V1×Cpr) ÷T=10.4×(ΔA+0.0364)÷Cpr
    4、按细胞/细菌数量计算：
    单位定义：在 37℃，每 104个细胞/细菌每小时生成 1μmoLH2O2 定义为一个酶活单位（U）。
    GOD (μmoL/h/104 cell)=[(ΔA+0.0364)÷4.8162]÷(500×V1÷V)÷T=0.021×(△A+0.0364)
    V---加入提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，0.06mL；
    T---反应时间，20min=1/3h；
    W---样本质量，g；
    500---细胞数量，万；
    Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（250μmol/mL）。
    2 把母液稀释成以下浓度：0，0.5，1，1.5，2，2.5μmol/mL。也可根据实际调整浓度。
    3 在 96 孔板中直接加入：20μL 标准品+80μL 试剂一+100μL 试剂二，混匀于 510nm 处
    读值，依据结果即可制作标准曲线。

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