间充质干细胞成软骨诱导分化试剂套装

产品介绍

由IMMOCELL研发团队精心研制的人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒，包含适合人脐带间充质干细胞生长的基础培养基、优级胎牛血清及诱导细胞分化所需的添加物。

本产品适用于人脐带间充质干细胞的成软骨诱导分化。大量细胞培养数据验证，本产品可稳定、高效诱导上述细胞分化为软骨细胞。

注意：本产品仅提供给进一步科研使用，不可用于临床治疗等其他用途。

成软骨分化套装

成软骨分化套装成分	货号	体积
Mesenchymal Stem Cells Chondrogenic Differentiation Medium MSC-CDM	IMC-013-M	180mL
优级胎牛血清	IMC-101-10	20mL
Supplement For Mesenchymal Stem Cells Chondrogenic Differentiation A 间充质干细胞成软骨诱导分化添加物	IMC-013-A	1mL
Supplement For Mesenchymal Stem Cells Chondrogenic Differentiation B 间充质干细胞成软骨诱导分化添加物B	IMC-013-B	1mL
Alcian Blue 8GX Solultion 阿利新蓝(pH=2.2)	IMC-904	10mL
核固红	IMC-905	10mL

质量控制

通过细菌、真菌、支原体、内毒素检测。

通过渗透压、pH检测。

通过产品性能检测

处理原则

1.严格的无菌环境。务必保证实验室整体和操作区域的清洁。

2.规范的操作方式。请按照产品说明书描述的方式操作，严格控制变量，做好对照实验。

3.各成分需按照保存条件妥善存放，并尽快使用。

4.若短期内无法用完整套培养基，应按套装内各成分体积比例分批配制并分装保存。

产品稳定性及保存条件

1.套装内所有成分均需避光保存。

2.套装内基础培养基需置于4℃冰箱保存，保质期为1年；其他成分需置于-20℃保存，保质期为2年。

3.配制后的完全培养基，需放置4℃保存，保质期为1个月；若能保证培养条件稳定，容器密封性能良好，避免冷热交替，则保质期可适当延长，但不得超过45天。

4.所有产品请于保质期内使用；过期的成分可能严重影响培养效果。

完全培养基的配制

所需材料

1.人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒

2.清洁、无菌、质量稳定的一次性耗材（移液管、移液器吸头、离心管等）

3.洁净的封口膜

4.铝箔纸等避光材料

操作步骤

1.配制前至少30min，将套装中人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化添加物（以下简称添加物）放置于4℃冰箱内，直至完全融化。

2.上下颠倒或轻弹试剂管以混匀试剂。

3.用75%医用酒精仔细擦拭所有成分外包装。在超净台内打开包装。

4.将添加物全部加入细胞基础培养基（以下简称基础培养基）中。

5.取少量基础培养基，洗涤添加物 I 试剂管，尽可能将所有成分全部加入基础培养基中。

6.拧紧基础培养基瓶盖，轻柔并充分摇匀。

7.用封口膜密封瓶口，用铝箔纸包裹瓶身，并标注名称、配制日期等信息。

特别提醒

1.若短期内无法用完全部培养基，我们建议分批配制；请按照套装内各成分比例，配制所需量；但剩余的成分必须严格按照各自的保存条件妥善保存，并且不可多次冻融。

2.人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒内的所有成分都严格控制无菌，一般情况下我们不建议再次除菌。若配制过程有污染风险，可将完全培养基过滤除菌。

3.配制完成的成软骨诱导分化培养基，请分装为小份，避免整瓶培养基反复温浴和冷藏交替

诱导分化操作流程

所需材料

1.人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化试剂盒

2. 4%多聚甲或 10%福尔

操作步骤

注意

1)本操作规程以六孔板为例，请根据实际情况选用合适的培养容器；

2)诱导培养基在使用前均需预热至37℃。

1. 将待诱导的人脐带间充质干细胞按照2×104cells/cm2的细胞密度接种于六孔板中，每孔加入2mL普通完全培养基。

2. 细胞置于37℃、5%CO2、饱和湿度的CO2培养箱中培养。

3. 当细胞融合度达到70%时，小心地将孔内完全培养基吸走，向六孔板中加入2mL人脐带间充质干细胞成软骨诱导分化培养基。

4. 每隔3天换用新鲜的人脐带间充质干细胞成骨诱导分化培养基。

5. 持续诱导，直至管内形成软骨球。

6. 诱导2~4周后，视细胞的形态变化及生长情况，用阿利辛蓝进行染色。

注意：1)小心操作，不要吸出软骨球;

2)后续细胞形成细胞团，换液十尽量小心，可每两天进行半换液更换新成软骨诱导培养基。

软骨球染色

所需材料

1.Phosphate-BufferedSaline（1×PBS）

2.4%多聚甲或10%福

3.阿利辛蓝

操作步骤

1. 对于培养细胞，用 4%多聚固定 10 min 以上;PBS 洗涤 2 min×2 次。

2. 1%阿利新蓝染色液(pH2.5)室温染色 30 min。

3. 流水冲洗 2 min，去离子水浸泡 2 min×2 次。

4. 0.1%核固红染色液室温染色 5 ~ 10 min。

5. 流水冲洗 2 min，去离子水浸泡 2 min×2 次。

6. 显微镜观察。

染色效果图