小鼠毛囊干细胞分离试剂盒

产品描述

小鼠毛囊干细胞(hair follicle stem cells, HFSCs)是一类位于毛囊隆突区(bulge region)的多能成体干细胞，具有自我更新和分化潜能，在毛囊周期性再生(生长期、退化期和静止期)及皮肤损伤修复中起关键作用。HFSCs表达特异性标记物(如CD34、Lgr5、K15、Sox9等)，其活性受多种信号通路(如Wnt、BMP、Shh等)和微环境(niche)调控。在毛囊进入生长期时，HFSCs被激活并分化为毛囊基质细胞，进而形成毛干和鞘层;在静止期则维持休眠状态。此外，HFSCs还具有向表皮、皮脂腺等细胞分化的潜能，参与皮肤稳态维持。近年来，HFSCs因其强大的再生能力成为组织工程、脱发治疗及干细胞生物学研究的重要模型。通过基因编辑(如敲除关键调控因子)或药物干预HFSCs的活性，可为毛发再生障碍性疾病提供潜在治疗策略。

适用范围

该试剂盒适用于C57、balb/c等不同品系的小鼠毛囊干细胞细胞提取试剂盒。

规格

本试剂盒规格为10次(以1只小鼠为1次计)

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表。试剂开封后，有效期为 6-8 周。

配套培养基信息

表1. 分离培养试剂盒组成信息

产品名称	产品规格	储存条件
小鼠毛囊干细胞细胞专用消化液	10 mL	-20°C,避光保存,3个月
小鼠毛囊干细胞细胞纯化液I	100 mL	-20°C,避光保存,3个月
小鼠毛囊干细胞细胞纯化液II	10 ml	-20°C,避光保存,3个月
小鼠毛囊干细胞细胞组织处理缓冲液	500mL	2-8°C,避光保存,3个月
小鼠毛囊干细胞细胞专用培养基	500mL	2-8°C,避光保存,3个月

 

分离步骤

实验前准备：小鼠毛囊干细胞专用培养基、小鼠毛囊干细胞专用消化液、小鼠毛囊干细胞纯化消化液I、II、小鼠毛囊干细胞组织处理缓冲液、鼠尾胶、PBS、手术器械、培养皿若干。

一、小鼠毛囊干细胞提取：下面以1只4周龄C57小鼠为例

1、预包被培养皿：

(1) 提取细胞：根据所使用培养皿大小吸取相应鼠尾胶包被培养皿30min，30min后吸弃培养皿，此时经包被的培养皿可直接使用。

(2) 细胞纯化：根据所使用培养皿大小吸取相应鼠尾胶包被培养皿1h，1h后吸弃培养皿，此时经包被的培养皿可直接使用。

2、脱颈处死小鼠，用眼科剪剪短触须并剪下触须皮肤，75%乙醇漂洗一次，再用组织处理缓冲液漂洗3次。

3、用精镊夹紧皮肤，显露内部含有毛囊区域，用另一把精镊将凸起毛囊取出，将多余胡须剪去，用组织处理缓冲液漂洗1次

4、在1.5mLEP管中装入1mL专用消化液，将所取毛囊转入1.5mLEP管，37℃下消化90min。

5、消化结束后，将毛囊用组织处理缓冲液漂洗一次后，种在所包被培养皿中，加入1mL专用培养基。待组织贴壁后可再缓缓加入1mL培养基，之后每2~3d更换一次培养基。

注：细胞会在组织贴壁后1~2天爬出。

6、原代细胞培养8~10d即可进行传代扩增：用纯化消化液I漂洗3次，再用1mL纯化消化液II在37℃、5%CO2培养箱中消化约8min，用3mL PBS终止消化.

7、在200g离心5min，将所得细胞打成悬液种在预先包被的培养皿中。

8、15~20min后将未贴壁细胞吸出，贴壁细胞继续用专用培养基培养，每2~3d换一次液。

9、待细胞生长至90%，符合传代状态时，用相同方法再纯化一次。

注意事项

1. 建议全程分离操作过程在冰上进行，可提高细胞活性。

2. 小鼠毛囊干细胞专用消化液、小鼠毛囊干细胞纯化液、培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。