人脐带静脉内皮细胞分离试剂盒

产品描述

人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，简称HUVEC)是脐静脉的重要结构组成细胞之一，在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。HUVEC具有扁平的细胞形态，细胞宽度较大而长度较短，排列紧密，其表面的微绒毛能够提高细胞的吸收和分泌能力。此外，HUVEC能够分泌多种抗凝物质从而保证血管的正常功能。目前HUVEC在心血管治疗、人工血管开发等方面具有广泛的应用价值，但目前HUVEC的分离仍面临挑战。该试剂盒采用联合酶消化法，可快速纯化获得人脐静脉内皮细胞。使用本试剂盒提取所得的人脐静脉内皮细胞纯度>90.0%，贴壁后可进行多项实验操作。

适用范围

本试剂盒适用于分离人脐带中的静脉内皮细胞。

规格

本试剂盒规格为2次(以1条脐带为1次计)

运输和存储条件

2-8 ℃保存与运输，保质期为参考下表，所有组分开封后，有效期为 6-8 周。

试剂盒组成信息

表1. 分离培养试剂盒组成信息

产品名称	产品规格	储存条件
脐带运输保存液	250 mL	2-8°C,避光保存,3个月
人脐带静脉内皮细胞组织处理缓冲液	500 mL	2-8°C,避光保存,3个月
人脐带静脉内皮细胞专用消化液	50 mL	2-8°C,避光保存,3 个月
人脐带静脉内皮细胞专用培养基	500 mL	2-8°C,避光保存,3 个月

 

分离步骤

实验前准备：脐带运输保存液、人脐带静脉内皮细胞专用消化液、人脐带静脉内皮细胞组织处理缓冲液(冰)、人脐带静脉内皮细胞专用培养基;实验需自备手术器械、提前将使用手术钳，灌胃针及玻璃大皿高温灭菌、6孔/6cm2/10cm2培养皿、离心管若干。

人脐带静脉内皮细胞细胞提取：下面以1条脐带为例

1.将15-20 cm长的新生儿脐带放入无菌的脐带运输储存液中储存。

2.使用50ml注射器装人脐带静脉内皮细胞组织处理缓冲液，用灌胃针灌满脐带后，用止血钳夹住脐带两端，轻缓揉捏，将脐带内的血块化开，方便冲洗干净。可重复2~3次，直至血块冲洗干净为止。

3. 用手术钳夹紧脐带下端，加入 15 mL(灌满为标准)的人脐带静脉内皮细胞专用消化液，37℃下消化10~15分钟，消化期间可以经常翻动脐带，使专用消化液在血管内流动，促使内皮与专用消化液充分接触。

4. 消化完后，收集消化液：先用钝头针头疏通下端流出口，防止阻塞，将下端手术钳松开，使消化液流入一个50 mL无菌离心管中(管内要有部分完全培养基或者纯血清)，用组织处理缓冲液冲洗脐带2~3次，每次都要用手轻微揉动，流出液也全部收集至50mL离心管中。

5.离心：将收集液置于离心机1000 rpm 离心3分钟。

6.去上清，加入10 mL专用培养基，用巴氏管吹散细胞，计数。

7.种板：将所有液体转入培养皿中，37℃培养。

7. 培养24小时后，倒掉培养基，并用无菌的PBS溶液清洗2~3次，洗掉红细胞和死细胞，加入10mL专用培养基。

8.之后每2天换一次培养基(每次换掉2/3的培养基)。

9.一般培养5~7天，细胞可长满至80-90%单层，这时可以传代。

注意事项

1. 建议全程分离操作过程在冰上进行，可提高细胞活性。

2. 脐带在脐带运输储液中，4℃下最多贮存24小时，室温下不超过6小时，否则废弃。

3. 人脐带静脉内皮细胞专用消化液、培养基中含有微生物生长所需的营养成分，请在超净工作台内打开，按照所需要量分装，并且用封口膜封住瓶口，即取即用，以避免污染。