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        骨髓基质干细胞的诱导分化

        互联网

        4006

        骨髓基质干细胞的诱导分化
        1.成软骨诱导

        骨髓基质干细胞培养7天后,加入软骨诱导液,诱导因子终浓度为TGF-p1 10ng/m1、IGFl00ng/m1、地塞米松0.1/1m01/L,转铁蛋白6.25ug/ml,诱导时间为2-4周。
        2.成骨诱导

        (1)骨髓基质干细胞培养7天后,加入成骨诱导液。诱导液成分为基础培养液加入10mmo]/Lβ-磷酸甘油、10nmol/L维生素D3等诱导成分。

        (2)特殊染色

        vonKossa染色:诱导4周,4%多聚甲醛室温固定30rain,蒸馏水冲洗,加入1%(W/V)硝酸银溶液,避光30min,加入0.1mmol/L硫代硫酸钠1h,蒸馏水冲洗,干燥封片。矿化结节呈现黑色。设诱导组、非诱导组、柠檬酸处理组。此方法用于特异性检测钙化结节形成能力。

        AlizarnRed染色:诱导3~4周,4%多聚甲醛室温固定30min,蒸馏水冲洗,加入0.1%AlizarnRed-Tris-HCL溶液(pH 8.3),室温10min。蒸馏水冲洗,干燥封片。钙盐沉积处呈红色。
        3.成脂肪诱导

        (1)骨髓基质干细胞培养7天后,吸去培养液,PBS轻轻冲洗后,加入成脂肪诱导液,其成分为基础培养液和0.5mmol/LIBMX、1umol/L地塞米松、10umol/L胰岛素、200/~mol/L吲哚美辛等,每4天更换培养液。倒置显微镜观察细胞形态的变化(有无脂滴形成)。

        (2)特殊染色

        油红染色:诱导2-3周进行油红染色,以观察细胞脂滴形成情况。染色前,细胞经4%甲醛4~C固定1h,70%异丙醇清洗,2%油红试剂室温放置5-10min,?0%异丙醇洗去多余的染料,蒸馏水洗涤,苏木精染色2rain。染色过程中,细胞绝对不要脱离液体环境超过30s,否则实验很难成功。

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