羊关联恶性卡他热病毒PCR试剂盒

羊关联恶性卡他热病毒PCR试剂盒
产品及特点： 
羊关联恶性卡他热病毒(Sheep-associated Malignant Catarrhal FeverVirus，SA-MCFV)是一种存在于上皮细胞屑中的病毒，能够引发以体表无毛处皮肤痘疹，能够使上呼吸道、口腔和食管部黏膜形成纤维素性坏死假膜。该病毒对外界是环境的抵抗力相当强，在上皮细胞屑中的病毒，虽然完全干燥和被直射日光作用许多星期，还不致被杀死；加热至 60℃需经 3 小时才被杀死，在-15℃以下的环境中可保持活力多年。
1%的火碱、1%的醋酸或 0.1%的可于 5 分钟内杀死此病毒，较强的抵抗力对羊的健康有巨大的潜在危害，因此羊关联恶性卡他热病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产品就是根据羊关联恶性卡他热病毒保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量PCR 产品。
1. 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增羊关联恶性卡他热病毒，与其他病原没有交叉反应。
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料，PCR后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做40μL体系的PCR 50次，但只能用于科研。
6. 本产品由江蓝纯生物提供，不得用于临床诊断。

规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	羊关联恶性卡他热病毒 PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	羊关联恶性卡他热病毒 PCR 阳性对照（1×10E8 /μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存： 
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其他试剂。
自备试剂： 
样品 DNA。
羊关联恶性卡他热病毒PCR试剂盒
使用方法
一、样品 DNA 的制备：
1. 用自选方法纯化N+2个样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N个样品，则需要做N+2个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 羊关联恶性卡他热病毒 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）： 
3. 对N+2个样品，在PCR时需要增加一个PCR阳性对照和一个PCR阴性对照，故需要设置N+4个反应。在N+4个PCR管中分别加入下列成分：

成份	N+2 个样品管	PCR 阴性对照	PCR阳性对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
羊关联恶性卡他热病毒PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2个样品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 阴性对照（水）	--	18μL	--
PCR 阳性对照（羊关联恶性卡他热病毒PCR阳性对照1000倍稀释液）	--	--	18μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR反应（35个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、电泳检测：
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。