羊关联恶性卡他热病毒PCR试剂盒

羊关联恶性卡他热病毒PCR试剂盒
英文名称：Sheep-associated Malignant Catarrhal Fever Virus
羊关联恶性卡他热病毒(Sheep-associated Malignant Catarrhal Fever Virus，SA-MCFV)是一种存在于上皮细胞屑中的病毒，能够引发以体表无毛处 皮肤痘疹，能够使上呼吸道、口腔和食管部黏膜形成纤维素性坏死假膜。该病 毒对外界是环境的抵抗力相当强，在上皮细胞屑中的病毒，虽然完全干燥和被 直射日光作用许多星期，还不致被杀死；加热至 60℃需经 3 小时才被杀死，在 -15℃以下的环境中可保持活力多年。1%的火碱、1%的醋酸或 0.1%的 汞可 于 5 分钟内杀死此病毒，较强的抵抗力对羊的健康有巨大的潜在危害，因此羊 关联恶性卡他热病毒的快速准确鉴定对该病的预防和检疫有着重要作用。本产 品就是根据羊关联恶性卡他热病毒保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据羊关联恶性卡他热病毒保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

羊关联恶性卡他热病毒PCR试剂盒包装规格及成分：

编号	成分	规格
试剂一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（红盖）
试剂二	超纯水	1 mL（亮黄色）
试剂三	羊关联恶性卡他热病毒PCR 引物混合液	100 μL（白盖）
试剂四	羊关联恶性卡他热病毒PCR 阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL）	50 μL（黄盖）
试剂五	使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照需要单独放置，不要污染其 他试剂。

自备试剂：DNA 模板


 

使用方法：

一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一 个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求 的样品起始量）中加 10μL 羊关联恶性卡他热病毒 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液 而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰 上待用。
二、设置 PCR 反应（40μL 体系）
3. 对 N+2 个样品，在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照，故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分：

成分	N+2 个 样品管	PCR 阴性 对照	PCR 阳性 对照
PCR Magic Mix 3.0	各 20 μL	20 μL	20 μL
羊关联恶性卡他热病毒 PCR 引物 混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 个样品 DNA 模板	各 18 μL
PCR 阴性对照（水）		18 μL
PCR 阳性对照（羊关联恶性卡他热病毒 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液）			18 μL

4. 按下表设置 PCR 反应：

过程	温度	时间
预变性	95℃	5 min
PCR 反应 （35 个循环）	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	30 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、电泳检测 5. 取 10-20 μL PCR 产物。1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在扩增结束后可以直接上样，不需要另外再加 loading buffer。阳性对照必须有预期条带出现，阴性对照必须无任何扩增，否则实 验无效。对没有扩增产物的样品，可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排 除 PCR 抑制剂的感染。


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