细胞培养瓶，25cm²，TC处理，红色滤盖，灭菌

重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作

-DNA液，加入6ml DMEM完全培养基，37℃孵育过夜，再换液。 7  培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变（CPE）出现（如用pAdTrack-CMV质粒，由于含GFP，可观察到绿色荧光）。 四 重组病毒鉴定 1  转导10-14d后，收集细胞沉淀，加入2ml灭菌的PBS混悬，冻融细胞，离心后收集上清保存于-80℃。 2  取30-50% 步骤1中上清，感染50-70%饱和度的25cm2 方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞

写给细胞小白的实用手册

灯进行整体消毒。长期未使用的细胞房在实验前需要用 20% 乙酸蒸 24 h。2. 二氧化碳培养箱消毒二氧化碳培养箱定期需要用 70% 乙醇擦拭托盘和内壁，同时使用手提紫外灯进行消毒。培养箱低端托盘的水也要为无菌水，并两周更换一次。3. 器皿灭菌、消毒玻璃器皿和螺口盖采用高压灭菌（121 ℃，100 kPa，20 min），玻璃器皿包括移液管、冻存瓶、盖玻片、载玻片、玻璃注射器、玻璃试管、吸管等。 螺口盖的盖子分为有內垫的金属或酚醛树脂盖、聚丙烯盖子、硅树脂盖子、白橡胶盖子。塑料器皿的消毒通常采用紫外

细胞培养的污染及控制

。另外，净化工作台使用过久，滤板未定期更换或长久不更换，滤气受尘埃堵塞，工作时不带口罩或外界气流过强，污染空气进入操作区，也会导致污染。春夏季南方地区多雨，空气湿度大，含菌量多，工作不注意也易造成污染。 3、清洗消毒 培养用物品、材料洗刷不净，培养用液和器材灭菌不彻底也会引入微生物和有毒物质。 4、操作 来自操作者的污染主要有以下几方面： （1）器材和溶液使用前未仔细检查是否污染过，或者是否已经消毒灭菌处理过，或者虽经处理，时隔已久又末重新处理。 （2）操作者未戴口罩、帽子，呼出气中排出细菌和支原